Главная       Продать работу       Блог       Контакты       Оплата       О нас       Как мы работаем       Регистрация       Вход в кабинет
Тех. дипломные работы
   автомобили
   спец. техника
   станки
   тех. маш.
   строительство
   электроснабжение
   пищевая промышленность
   водоснабжение
   газоснабжение
   автоматизация
   теплоснабжение
   холодильники
   машиностроение
   др. тех. специальности

Тех. курсовые работы
   автомобили
   спец. техника
   станки
   тех. маш.
   строительство
   детали машин
   электроснабжение
   газоснабжение
   водоснабжение
   пищевая промышленность
   автоматизация
   теплоснабжение
   ТММ
   ВСТИ
   гидравлика и пневматика
   машиностроение
   др. тех. специальности

Тех. дополнения
   Отчеты
   Расчетно-графические работы
   Лекции
   Задачи
   Лабораторные работы
   Литература
   Контрольные работы
   Чертежи и 3D моделирование
   Тех. soft
   Рефераты
   Общий раздел
   Технологический раздел
   Конструкторский раздел
   Эксплуатационный раздел
   БЖД раздел
   Экономический раздел
   Экологический раздел
   Автоматизация раздел
   Расчетные работы

Гум. дипломные работы
   педагогика и психология
   астрономия и космонавтика
   банковское, биржевое дело
   БЖД и экология
   биология и естествознание
   бухгалтерский счет и аудит
   военное дело
   география
   геология
   государство и право
   журналистика и СМИ
   иностранные языки
   история
   коммуникации
   краеведение
   кулинария
   культура и искусство
   литература
   экономика и торговля
   математика
   медицина
   международное отношение
   менеджмент
   политология
   музыка
   религия
   социология
   спорт и туризм
   таможенная система
   физика
   химия
   философия
   финансы
   этика и эстетика
   правознавство

Гум. курсовые работы
   педагогика и психология
   астрономия и космонавтика
   банковское, биржевое дело
   БЖД и экология
   биология и естествознание
   бухгалтерский счет и аудит
   военное дело
   география
   геология
   государство и право
   журналистика и СМИ
   иностранные языки
   история
   коммуникации
   краеведение
   кулинария
   культура и искусство
   литература
   экономика и торговля
   математика
   медицина
   международное отношение
   менеджмент
   политология
   музыка
   религия
   социология
   спорт и туризм
   таможенная система
   физика
   химия
   философия
   финансы
   этика и эстетика
   правознавство

Гум. дополнения
   Отчеты
   Расчетные работы
   Лекции
   Задачи
   Лабораторные работы
   Литература
   Контрольные работы
   Сочинения
   Гум. soft
   Рефераты

Рефераты
   Авиация и космонавтика
   Административное право
   Арбитражный процесс
   Архитектура
   Астрология
   Астрономия
   Банковское дело
   Безопасность жизнедеятельнос
   Биографии
   Биология
   Биология и химия
   Биржевое дело
   Ботаника и сельское хоз-во
   Бухгалтерский учет и аудит
   Валютные отношения
   Ветеринария
   Военная кафедра
   ГДЗ
   География
   Геодезия
   Геология
   Геополитика
   Государство и право
   Гражданское право и процесс
   Делопроизводство
   Деньги и кредит
   ЕГЭ
   Естествознание
   Журналистика
   ЗНО
   Зоология
   Издательское дело и полиграф
   Инвестиции
   Иностранный язык
   Информатика
   Информатика, программировани
   Исторические личности
   История
   История техники
   Кибернетика
   Коммуникации и связь
   Компьютерные науки
   Косметология
   Краеведение и этнография
   Краткое содержание произведе
   Криминалистика
   Криминология
   Криптология
   Кулинария
   Культура и искусство
   Культурология
   Литература : зарубежная
   Литература и русский язык
   Логика
   Логистика
   Маркетинг
   Математика
   Медицина, здоровье
   Медицинские науки
   Международное публичное прав
   Международное частное право
   Международные отношения
   Менеджмент
   Металлургия
   Москвоведение
   Музыка
   Муниципальное право
   Налоги, налогообложение
   Наука и техника
   Начертательная геометрия
   Оккультизм и уфология
   Остальные рефераты
   Педагогика
   Политология
   Право
   Право, юриспруденция
   Предпринимательство
   Прикладные науки
   Промышленность, производство
   Психология
   психология, педагогика
   Радиоэлектроника
   Реклама
   Религия и мифология
   Риторика
   Сексология
   Социология
   Статистика
   Страхование
   Строительные науки
   Строительство
   Схемотехника
   Таможенная система
   Теория государства и права
   Теория организации
   Теплотехника
   Технология
   Товароведение
   Транспорт
   Трудовое право
   Туризм
   Уголовное право и процесс
   Управление
   Управленческие науки
   Физика
   Физкультура и спорт
   Философия
   Финансовые науки
   Финансы
   Фотография
   Химия
   Хозяйственное право
   Цифровые устройства
   Экологическое право
   Экология
   Экономика
   Экономико-математическое мод
   Экономическая география
   Экономическая теория
   Этика
   Юриспруденция
   Языковедение
   Языкознание, филология

Главная > Гум. дипломные работы > биология и естествознание
Название:
Исследование уровня цитокинов у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями

Тип: Дипломные работы
Категория: Гум. дипломные работы
Подкатегория: биология и естествознание

Цена:
1 грн



Подробное описание:

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ
Пензенский государственный педагогический университет
имени В. Г. Белинского

Факультет Кафедра
Естественно-географический Биохимии

 

ДИПЛОМНАЯ РАБОТА НА ТЕМУ:

Исследование уровня цитокинов у больных
с гнойно-воспалительными заболеваниями

 

Студент__________Акишина Ю. В.
Руководитель___ _Фирстова Н. В.
_____________________Дружинина Т. А.
К защите допустить. Протокол №
от «_____» ____________2008 г.
Зав. кафедрой______Генгин М. Т.

 

 


Пенза, 2008 год
СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Цитокины
1.1.1. Клетки-продуценты цитокинов
1.1.2. Рецепторы цитокинов и механизм действия цитокинов на клетку
1.1.3. Классификация цитокинов по механизму действия
1.1.4. Интерлейкин-4
1.1.5. Гамма-интерферон
1.2. Гнойно-воспалительные заболевания
1.2.1. Фурункулез
1.2.2. Остеомиелит
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Метод определения уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови.…
2.2.2. Метод определения уровня гамма-интерферона в сыворотке крови
2.2.3. Статистическая обработка результатов исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных с различным уровнем иммуноглобулина Е при хроническом рецидивирующем фурункулезе
3.1.1. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови у больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом
3.1.2. Результаты исследования уровня гамма-интерферона в сыворотке крови у больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом
3.2. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных с различным уровнем иммуноглобулина Е при хроническом остеомиелите
3.2.1. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови у больных с хроническим остеомиелитом
3.2.2. Результаты исследования уровня гамма-интерферона в сыворотке крови у больных с хроническим остеомиелитом
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Интерлейкин-4 и гамма-интерферон при хроническом рецидивирующем фурункулезе
4.2. Интерлейкин-4 и гамма-интерферон при хроническом остеомиелите…
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БПС (STP) – белки-переносчики сигнала
ГВЗ – гнойно-воспалительные заболевания
Г-КСФ – гранулоцитарный колониестимулирующий фактор
ГМ-КСФ – гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор
ГКГ – главный комплекс гистосовместимости
ИЛ, IL – интерлейкин
ИФН, IFN – интерферон
ИФНγ – интерферон-гамма
ЛПС – липополисахарид
М-КСФ – макрофагальный колониестимулирующий фактор
О – остеомиелит
ПСАТ (STAT, от англ. Signal transducers and activators of transcription) – переносчики сигнала и активаторы транскрипции
ТМБ – тетраметилбензидин
Тх – Т-хелперы
ФНО – фактор некроза опухоли
Ф – фурункул
ХРФ – хронический рецидивирующий фурункулез
- внести в список: Кетлинский С.А. // Роль Т-хелперов типов 1и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета / Иммунология, 2002. - том. 23. - № 2. - С.77 - 79.
- ВНЕСТИ В СПИСОК: Медуницын Н.В. // Цитокины и аллергия, опосредованная IgE / Иммунология, 1993. - № 5. - С.11 - 18.
- ВНЕСТИ В СПИСОК: Акжигитов Г.Н., Галеев М.А., Сахаутдинов В.Г., Юдин Я.Б. Остеомиелит, М.,Медицина, 1986, с.23-28
- ВНЕСТИ В СПИСОК: Белохвостикова Т.С., Кирдей Л.Е., Гаврилова Е.Ю., Промтов М.В., Леонова С.Н., Кирдей Е.Г. Коррекция вторичных нарушений иммунной системы при хроническом посттравматическом остеомиелите./Медицинская иммунология, 2002, т.4, №2, с.228-229.
- выверять литературу‚ затем убрать висячие строки‚ затем выверять страницы содержания и текст диплома

ВВЕДЕНИЕ

Гнойно-воспалительные заболевания (ГВЗ) остаются одной из актуаль-ных проблем современной медицины. Так 1/3 всех хирургических больных – это больные с гнойно-воспалительными осложнениями. В дерматологической практике на долю гнойно-воспалительных процессов приходится 29% случаев, а у детей 37% всех кожных заболеваний.
Иммунология ушедшего столетия, как известно, была богата новыми основополагающими фактами, благодаря которым она стала одной из цен-тральных медико-биологических наук современности. К числу фактов, кото-рые были положены в основу развития одной из важнейших областей имму-нологии – учения о медиаторах иммунитета – относится и комплекс данных, появившихся еще в 60-х годах прошлого столетия и сформировавшихся в на-стоящее время в учение о цитокинах.
Огромное количество имеющихся и постоянно пополняющихся данных, новые и подчас неожиданные факты, не прекращающий увеличиваться перечень различных цитокинов, идентификация их рецепторов и соответст-вующих генов, описание каскада молекулярных основ лиганд-рецепторных взаимодействий – далеко не полный перечень фактов, которые иллюстрируют масштабность этого направления исследований.
Параллельно с развитием фундаментальных исследований, практически с такой же стремительностью началось и использование определения ци-токинов в клинике при самой разнообразной патологии, и сейчас практически невозможно назвать патологию, которая не была бы предметом изучения цитокинов.
Определение цитокинов в клинике преследует различные цели: оценку тяжести течения процесса, эффективности терапии, прогнозирование и др. К сожалению, предпринимаются и попытки использования определения цито-кинов для диагностики, что в настоящее время пока не обосновано.
Цель нашей работы состояла исследовании уровня интерлейкина 4 и гамма-интерферона в сыворотке крови при хроническом рецидивирующем фурункулезе и хроническом остеомиелите у больных с разным уровнем об-щего иммуноглобулина Е.
В связи с поставленной целью были определены следующие задачи:
1. Освоить методику двухсайтового иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием набора "ИФА-IL-4" и "ИФА-IFN-gamma" для опре-деления интерлейкина 4 и гамма-интерферона соответственно в сыворотке крови.
2. Провести лабораторный анализ концентрации интерлейкина 4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных хроническим рецидивирую-щим фурункулёзом на фоне повышенного уровня иммуноглобулина Е.
3. Провести лабораторный анализ концентрации интерлейкина 4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных хроническим рецидивирую-щим фурункулёзом на фоне нормального уровня иммуноглобулина Е.
4. Провести лабораторный анализ концентрации интерлейкина 4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных хроническим остеомиелитом на фоне повышенного уровня иммуноглобулина Е.
5. Провести лабораторный анализ концентрации интерлейкина 4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных хроническим остеомиелитом на фоне нормального уровня иммуноглобулина Е.


ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.2. Цитокины: общие сведения

Термин предложен С. Кохеном в 1974г.
Цитокины – группа гормоноподобных белков и пептидов, с молекуляр-ной массой от 8 до 90 кДа, часто гликозилированных, синтезируемых и сек-ретируемых клетками иммунной системы и другими типами клеток.
От гормонов цитокины отличаются лишь частично: они продуцируются не железами внутренней секреции, а различными типами клеток; кроме того, они контролируют гораздо более широкий спектр клеток-мишеней по сравне-нию с гормонами.
Разнообразные биологические функции цитокинов подразделяются на группы [Перцева Т.А., Конопкина Л.И. Интерфероны и их индукторы // Український хіміотерапевтичний журнал. – 2001. №2. – С. 62-67.]:
• они управляют развитием и гомеостазом иммунной систем;
• осуществляют контроль за ростом и дифференцировкой клеток крови (системой гемопоэза);
• принимают участие в неспецифических защитных реакциях орга-низма, оказывая влияние на воспалительные процессы, свертывание крови, кровяное давление;
• цитокины принимают участие в регуляции роста, дифференцировки и продолжительности жизни клеток, а также в управлении апоптозом.
По структуре выделяют несколько разновидностей молекул цитокинов, каждый из которых кодируется собственными генами. Состоят цитокины из одной – двух, реже более, полипептидных (гомо- и гетерологичных) цепей (мономеры, димеры, тримеры)‚ с молекулярной массой от 8 до 90 кДа, в ос-новном 15-35 кДа. Подавляющее большинство из них в качестве характерно-го структурного элемента содержит 4 α-спирали и лишь для немногих (ИЛ-1, ФНОβ, трансформирующий фактор роста) характерно преобладание β-слоистой структуры.

1.1.1. Клетки-продуценты цитокинов

Можно выделить 3 относительно автономные группы клеток – проду-центов цитокинов (табл. 1). Это
• стромальные соединительнотканные клетки, которые вырабатывают цитокины и ответственны преимущественно за гемопоэз;
• моноциты/макрофаги, которые являются продуцентами цитокинов – медиаторов воспаления;
• лимфоциты, вырабатывающие лимфокины, которые обеспечивают развитие антигенспецифической составляющей иммунного ответа.

Таблица 1.
Основные типы клеток – продуцентов цитокинов
Клетки-продуценты Индукторы цитокинов Кинетика выра-ботки Продуцируемые цито-кины
Стромальные клетки (фиб-робласты, эндотелиальные клетки) Контактные взаимодействия, бактериальные продукты В пределах часа мРНК, через 3-4ч пик секреции цито-кинов ГМ, Г, М-КСФ; ИНФβ, ИЛ-6,7,8,11
Моноциты/макрофаги Бактерии и их продукты, по-лиэлекролиты, форбловые эфиры В пределах часа мРНК, через 6-14ч пик секреции цито-кинов ИЛ-1,6; ФНОα, ИЛ-10,12,15; ГМ, Г, М-КСФ, ТФРβ, ИНФα, хемокины.
Tх1 Связывание антиге-на/митогена через TCR-CD3/CD28+ИЛ-12 Через 5-8 часов мРНК, через 10-48ч пик секреции цитокина ИЛ-2, ИНФγ, ФНОα и β, ИЛ-3, ГМ-КСФ, хемоки-ны
Tх2 Связывание антиге-на/митогена+ИЛ-4 Через 5-8 часов мРНК, через 24-48ч пик секреции цитокинов ИЛ-4,5,6,9,10,13,3; ГМ-КСФ, хемокины

Все клетки-продуценты цитокинов характеризуются своим собственным типом ответа на активирующие воздействия и природой активаторов, а также собственным, хотя и значительно перекрывающимся набором проду-цируемых ими цитокинов (табл. 1) и теми процессами, реализацию которых они обеспечивают. [Paul W.E., Seder R.A. Lymphocyte responses and cytokines Cell, 76, 241 - 251, 1994 Review ]
В норме уровень продукции цитокинов стромальными клетками невы-сок. Стимулами для выработки этих цитокинов в отсутствие повреждающих и патогенных факторов служат, по-видимому, контакты с кроветворными клетками. Бактериальные продукты существенно усиливают выработку ука-занных цитокинов, причем это происходит не только в кроветворных органах, но и в очагах агрессии, что приводит к формированию экстрамедуллярных очагов кроветворения. В условиях активации аналогичную активность проявляют эпителиальные клетки кожи и слизистых оболочек.
Выработка цитокинов (монокинов) клетками миелоидно-моноцитарного происхождения индуцируется главным образом под воздей-ствием бактериальных продуктов. Вызвать ее могут также многие метаболи-ты, сами цитокины, пептидные факторы, полиэлектролиты, а также контакты с окружающими клетками, процессы адгезии и фагоцитоза. Активация цито-киновых генов происходит в моноцитах и макрофагах в пределах 1ч, и в ближайшие часы цитокин уже можно обнаружить в среде. Среди выделяемых этими клетками цитокинов преобладают факторы, участвующие в развитии воспаления. Их называют монокинами.
Третью группу клеток – продуцентов цитокинов (лимфокинов) со-ставляют лимфоциты. Практически все разновидности лимфоцитов способны выделять цитокины, однако «профессиональными» продуцентами их яв-ляются СD4+-клетки-хелперы. Покоящиеся лимфоциты не продуцируют гу-моральных факторов. Активация клеток осуществляется в результате связы-вания антигенраспознающих рецепторов и корецепторов. Самый ранний из лимфокинов – ИЛ-2 – появляется в цитоплазме Т-клеток через 2 часа после стимуляции; остальные лимфокины вырабатываются значительно позже и в определенной последовательности: ИЛ-4 через 4 часа, ИЛ-10 через 6 часа, ИЛ-9 через 24 часа. Пик выработки различных лимфокинов варьирует: 12 ч для ИЛ-2, 48 ч для ИЛ-4 и 5, 72 ч для ИЛ-9 и ИФНγ. Эта последовательность отражает процессы дифференцировки Т-хелперов.
Цитокины начинают синтезироваться клетками только при наличии чужеродного агента в организме. Это способствует развитию иммунной ре-акции, охраняющей постоянство внутренней среды организма от всего гене-тически чужеродного (рис. 1).

Рис. 1. Цитокины, общая схема действия
После выделения клетками-продуцентами цитокины имеют короткий период полувыведения из кровотока. До 50% циркулирующих цитокинов ин-тернализуется в течение 30 минут. Выведение катаболизированных цитокинов из организма осуществляется печенью и почками. Секреция цитокинов – краткосрочный процесс. Кодирующая цитокины мРНК нестабильна, что в сочетании с краткосрочностью транскрипции генов цитокинов приводит к краткосрочности их биосинтеза. [Кольман Я., Рём К. – Г., Наглядная био-химия, издательство «Мир», стр.378-379].
Говоря об особенностях цитокинов, нужно учитывать следующее:
1. Один цитокин может продуцироваться более чем одним типом кле-ток;
2. Одна клетка может продуцировать более чем один цитокин;
3. Один цитокин может действовать на более чем один тип клеток;
4. Более чем один цитокин может индуцировать одинаковую функцию у конкретно взятого типа клеток. [Дранник Г. Н. Клиническая иммунология и аллергология, МИА, Москва 2003г. С. 98-99.].
Обладая широким спектром биологической активности, они определя-ют не только адекватный уровень иммунного ответа, но и регулируют взаи-модействия главных биологических интегративных систем организма – нервной, иммунной и эндокринной.
Цитокины взаимосвязаны и образуют цельную систему взаимодейст-вующих элементов – цитокиновую сеть.

1.1.2. Рецепторы цитокинов и механизм действия цитокинов на клетку

Цитокины действуют
• аутокринно (т.е. на клетку, которая их продуцирует);
• паракринно (на клетки, расположенные вблизи, например в очаге воспаления или в лимфоидном органе);
• эндокринно-дистанционно – на клетки любых органов и тканей после попадания цитокина в циркуляцию крови [Симбирцев А.С. // Цитокины и воспаление. 2002. № 1. С. 9–16.].
Образование и высвобождение этих высокоактивных молекул проис-ходит кратковременно и жестко регулируется.
Одна часть цитокинов обладает плюрипотентным действием, т.е. дей-ствует на различные клетки-мишени, другая – оказывает специфическое воз-действие на определенные клеточные линии. Влияние цитокинов на проли-ферацию и дифференцировку клеток-мишеней подчиняется определенной последовательности; немаловажным также является концентрация и комби-нация действующих цитокинов.
Цитокины – гидрофильные сигнальные вещества, действие которых опосредовано специфическими высокоаффинными рецепторами на внешней стороне плазматической мембраны, чувствительных к цитокинам клеток.
Рецепторы к цитокинам выделяют в 2 крупных семейства:
• семейство-SWISS характеризуется наличием в составе молекул внеклеточных участков с гомологичной последовательностью длиной при-мерно в 200 аминокислотных остатков.
SWISSPROT: CRF4_HUMAN
SWISSPROT: CYRB_HUMAN
SWISSPROT: CYRG_HUMAN
SWISSPROT: FLT3_HUMAN
К этому суперсемейству относятся рецепторы к ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-9, ИЛ-12, гранулоцитарному колониестимулирующему фактору (Г-КСФ) и гранулоцитарно-макрофагальному колониестимулирую-щему фактору (ГМ-КСФ). В него же входят рецепторы для гуморальных факторов (гормона роста и пролактина), действующих преимущественно вне иммунной системы.
• семейство-SITE объединяет рецепторы ко всем интерферонам, а также рецепторы к ИЛ-1α, ИЛ-1β и макрофагальному колониестимулирую-щему фактору (М-КСФ):
PROSITE: RECEPTOR_CYTOKINES_1
PROSITE: RECEPTOR_CYTOKINES_1
PROSITE: PROTEIN_KINASE_ATP
PROSITE: PROTEIN_KINASE_TYR
PROSITE: RECEPTOR_TYR_KIN_III
Существуют общие групповые рецепторы, способствующие устранению избытка цитокинов в очаге поражения. [Becker S., Groner B. & Muller C.W. Three-dimentional structure of the Stat3b homodimer bound to DNA Nature, 394, 145 - 151, 1998 ]
Все рецепторы цитокинов представляют собой трансмембранные гли-копротеины, у которых внеклеточная часть отвечает за связывание цитокина. Как правило, эти рецепторы состоят более чем из одной субъединицы, причем высокоаффинное связывание является следствием взаимодействия с разными субъединицами, каждая из которых сама способна связывать соответствую-щий цитокин, но с более низкой аффинностью. Нередко на клетках-мишенях цитокинов обнаруживаются несколько типов центров связывания, различающихся аффинностью к цитокину. В составе клеточных мембран одни цепи реагируют только с определенным цитокином, в то время как другие способны формировать общие рецепторы для разных цитокинов. Наличие общих структур в рецепторах может обусловливать функциональное сходст-во ряда цитокинов. [Кольман Я., Рём К. – Г., Наглядная биохимия, изда-тельство «Мир»]
Синтез рецепторов протекает более интенсивно и длительно, чем синтез соответствующих цитокинов, что обусловливает их более полную и быструю элиминацию из сосудистого русла и реализацию биологического эффекта в очаге поражения. Растворимый рецептор, связывающийся с цитокином, – это отщепленный ферментом внеклеточный домен мембранного рецептора. Растворимые рецепторы сохраняют высокую аффинность в отношении своих лигандов и благодаря этому способны нейтрализовывать цитокины, препятствуя их доступу к интактным мембранным рецепторам; их можно обнаружить в сыворотке и моче. Растворимые рецепторы могут выполнять функции конкурирующих антагонистов, а также участвовать в транспорте, доставке цитокинов в очаг поражения и выведении их из организма.
Связывание цитокина с соответствующим рецептором обеспечивает трансмембранное проведение сигнала в клетку, что, в свою очередь, обеспе-чивает активацию цитоплазматических ферментов и, в частности, фосфори-лирование тирозинкиназ.
Сами цитокиновые рецепторы не обладают тирозинкиназной активно-стью (за немногими исключениями). После связывания с цитокином (1) (см. рис. 3) молекулы рецептора ассоциируют, образуя гомодимеры. Кроме того, они могут образовывать гетеродимеры за счет ассоциации с белками-переносчиками сигнала [БПС (STP)] или стимулировать димеризацию самих БПС(2). Цитокиновые рецепторы класса I могут агрегировать с тремя типами БПС: белками GP130, βс или γс. Эти вспомогательные белки сами не способны связывать цитокины, но они осуществляют передачу сигнала на тирозин-киназы (3). Одинаковые спектры биологической активности многих цитоки-нов объясняются тем, что различные цитокин-рецепторные комплексы могут активировать одни и те же БПС. [Brisce J. et al. JAKs and STATs branch out Trends in Cell Biology, 6, 336 - 340, 1996]
Активация (фосфорилирование) тирозин/сериновых киназ приводит к запуску каскада ферментативных процессов, в результате которых в клетках накапливаются фосфорилированные белки (рис. 2). Эти белки из цитоплазмы поступают в ядро клетки и взаимодействуют с определёнными генами в мо-лекуле ДНК, активируя процесс транскрипции этих генов и синтез соответ-ствующих и-РНК или репликацию ДНК. Накопление и-РНК приводит, в свою очередь, к синтезу и накоплению в клетке набора новых белковых молекул, что проявляется в изменении фенотипических свойств и поведения клеток. [Кашкин К.П. Цитокины иммуной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность (лекция) // Клиническая лабораторная диагностика. – 1998. №11. – С. 21 – 32.]

Рис. 2. Упрощенная схема передачи сигнала от рецептора гамма-интерферона с использованием Jak-STAT пути
В качестве примера передачи сигнала от цитокинов на рис. 3 показано, как рецептор ИЛ-6 (IL-6) после связывания с лигандом (1) стимулирует ди-меризацию GP130 (2). Димер мембранного белка GP130 связывает и активи-рует цитоплазматическую тирозинкиназу ЯК-семейства (Янус-киназы, имеющие два активных центра) (3). Янус-киназы фосфорилируют цитокино-вые рецепторы, БПС и различные цитоплазматические белки, которые осу-ществляют дальнейшую передачу сигнала; они также фосфорилируют фак-торы транскрипции – переносчики сигнала и активаторы транскрипции [ПСАТ (STAT, от англ. Signal transducers and activators of transcription)]. Эти белки относятся к семейству БПС, имеющих в структуре SH2-домен, узнаю-щий остатки фосфотирозина. Поэтому они обладают свойством ассоцииро-вать с фосфорилированным цитокиновым рецептором. Если затем происходит фосфорилирование молекулы ПСАТ (4), фактор переходит в активную форму и образует димер (5). После транслокации в ядро димер в качестве фактора транскрипции связывается с промотором инициируемого гена и индуцирует его транскрипцию (6). [Brisce J. et al. JAKs and STATs branch out Trends in Cell Biology, 6, 336 - 340, 1996] [Кольман Я., Рём К. – Г., Наглядная биохимия, издательство «Мир»]

Рис. 3. Механизм действия цитокинов на примере ИЛ-6
Некоторые цитокиновые рецепторы могут за счет протеолиза утрачи-вать экстрацеллюлярный лигандсвязывающий домен (на рис. 3 не приведен). Домен поступает в кровь, где конкурирует за связывание с цитокином, что снижает концентрацию цитокина в крови. [Кольман Я., Рём К. – Г., На-глядная биохимия, издательство «Мир»].
1.1.3. Классификация цитокинов по механизму действия
К системе цитокинов в настоящее время относят около 200 индивиду-альных полипептидных веществ, которые по структурным особенностям и биологическому действию делятся на несколько самостоятельных групп. Группировка цитокинов по механизму действия позволяет разделить их на следующие группы:
1 группа. Провоспалительные, обеспечивающие мобилизацию воспали-тельного ответа;
2 группа. Противовоспалительные, ограничивающие развитие воспале-ния;
3 группа. Регуляторы клеточного и гуморального иммунитета – естест-венного или специфического, обладающие собственными эффекторными функциями (противовирусными, цитотоксическими).
Согласно одной из принятых классификаций к цитокинам относят:
• интерфероны, представляющие собой большую группу противови-русных пептидов (IF-α, IF-β, IF-γ, IF-ω, IF-τ);
• колониестимулирующие факторы, активирующие размножение и дифференцировку клеток-предшественников различных ростков гемопоэза на различных этапах их созревания (G-CSF, M-CSF, GM-CSF);
• хемокины, или хемотаксические цитокины, обеспечивающие акти-вацию миграции разных типов лейкоцитов и некоторых других _лееток (PF-4, MIP-2, MCP-1);
• трансформирующие ростовые факторы (PD-GF, TGF-β);
• группа факторов некроза опухолей – ФНО (TNF-α, TNF-β);
• интерлейкины ИЛ 1-29 (IL 1-29). ИЛ с номерами 1-29 нельзя объе-динить в одну подгруппу цитокинов, связанных общностью функций, и они могут быть разделены на провоспалительные цитокины, ростовые и диффе-ренцировочные факторы лимфоцитов и отдельные регуляторные цитокины. [Завьялов В.П. Структурно-функциональная классификация и эволюция цитокинов // Вестник РАМН. – 1993. №2. – С. 8 – 10.].
1.1.1.4. Интерлейкин-4
Иммунная система представляет собой комплекс клеток, взаимодейст-вующих на основе принципов и механизмов саморегуляции, которые реали-зуются в значительной мере через медиаторы – цитокины.
Интерлейкины – белки, продуцируемые макрофагами и Т-лимфоцитами и обеспечивающие рост лимфоидных и, вероятно, других клеток. Эти белки различаются по физико-химическим свойствам, строению и функциональной активности. [Agui T. Stimulation of interleukin-6 production by endothelin in rat bone marrow-derived stromal cells. // Blood 1994, Vol. 84, P. 2531]
ИЛ-4 (В-клеточный стимулирующий фактор). Продуцируется акти-вированными Т-хелперами 2-го типа.
Интерлейкин-4 впервые описан в 1982 г. Паулем, обнаружившим, что супернатант стимулированных митогеном лаконоса EL-4 клеток способен поддерживать рост B-клеток после воздействия иммуноглобулина, заставляя их вступать в S-фазу [Paul W. //Blood. 1991. V. 77. P. 1859.].
Обнаруженный цитокин, как и ИЛ-2 и ИЛ-3, относится к группе гемо-поэтинов. Раньше его называли BCGF- I (от англ. B-cell growth factor), т.е. фактор роста B-клеток. Он представляет собой мономер, включающий 129 аминокислотных остатков. В силу разной степени гликозилирования этого цитокина молекулярная масса колеблется от 18 кДа до 22 кДа.
Особенность ИЛ-4, отличающая его от других цитокинов, состоит в наличии видовой специфичности. ИЛ-4 человека оказывает биологическое действие на клетки человека и обезьян, но не мышей. В свою очередь ИЛ-4 мыши действует только на клетки мышей. Источником ИЛ-4 являются T-хелперы, стимулированные митогеном, тучные клетки, неидентифицирован-ные клетки стромы костного мозга (см. рис. 4). ИЛ-4 – продукт субпопуляции активированных T-клеток – действует через специфический рецептор.

Рис. 4. Клетки-продуценты и клетки-мишени интерлейкина-4.

Основной клеткой-продуцентом интерлейкина-4 (ИЛ-4) является хел-перная Т-клетка. Клетками-мишенями является широкий набор как зрелых клеток, так и клеток, находящихся на наиболее ранних стадиях гемопоэза.
Рецепторы ИЛ-4, с молекулярной массой 139 кДа, выявлен на покоя-щихся T-клетках, B-клетках, макрофагах, тучных клетках, на стромальных клетках костного мозга, клетках печени, мышцах, фибробластах. [http://humbio.ru/humbio/apop_cyt/00001e1d.htmKeegan A., Nelms K., Wang L., Pierce J., Paul W. // Immunol. Today. 1994. V. 15. P. 423].
Известно что ИЛ-4 усиливает экспрессию антигенов гистосовместимо-сти II класса (MHC II) в покоящихся В-клетках, а также синтез иммуноглобу-линов IgG и IgЕ после стимуляции липополисахаридом (ЛПС), поддерживает жизнеспособность и рост интактных Т-клеток, повышает активность цито-токсических Т-лимфоцитов, усиливает пролиферацию предшественников ге-мопоэза при ответе на ростовые факторы. Терапевтический потенциал цито-кина связан с его возможностью восстанавливать клеточный и гуморальный иммунитет [Anliytsky W., Schuler M,, Peschel C. // Drugs. 1994. V. 48. 5. P. 667.].
По отношению к В-клеткам ИЛ-4 выступает в качестве костимулятора пролиферации. Так, он не оказывает какого-либо влияния на покоящиеся B-клетки, однако достаточно подействовать на них одним из специфических для данных клеток индуктором активации, чтобы проявилось биологическое действие ИЛ-4: резкое повышении пролиферации данного типа клеток.
Известна также способность ИЛ-4 повышать уровень продукции IgE. Предположительно это происходит за счет усиления пролиферации клона клеток, продуцирующих данный класс иммуноглобулинов. При этом, чтобы такой клон ответил усилением продукции иммуноглобулинов, во всех случа-ях необходима предварительная специфическая (антигеном) или неспецифи-ческая (митогеном) стимуляция отвечающих клеток.
Выяснилось, что ИЛ-4 способен усиливать пролиферацию и Т-клеток, относящихся к различным субпопуляциям. Его действие на Т-клетки, как и на В-клетки проявляется только после предварительной их активации антигеном или митогеном.
По своей природе ИЛ-4 выступает в качестве плейотропного регулято-ра, так как взаимодействует с самыми разнообразными типами клеток. Так, его действие на макрофаги проявляется в усилении экспрессии молекул II класса МНС и Fc-рецептора для IgG, приобретении противоопухолевой ак-тивности по отношению к фибросаркоме, усилении антигенпредставляющей функции. [Anliytsky W., Schuler M,, Peschel C. // Drugs. 1994. V. 48. * 5. P. 667.]
Участвует ИЛ-4 и в развитии костномозговых клеток-предшественников. Один ИЛ-4 не изменяет интенсивность пролиферации этих клеток, но усиливает митотические процессы в сочетании с другими ростовыми факторами. Тандем ИЛ-4 с гранулоцитарным колониестимули-рующим фактором (Г-КСФ) обеспечивает более активное размножение кле-ток гранулоцитарного и моноцитарного ростков дифференцировки, тандем с эритропоэтином – эритроидных предшественников, с ИЛ-1 – размножение клеток-предшественников мегакариоцитарного пути развития.
Таким образом основная функция ИЛ-4 состоит в переключении синте-за IgG1 на синтез IgG4 и IgE. Совместно с другими цитокинами способствует пролиферации тканевых базофилов. Усиливает пролиферацию В-клеток, по-вышает экспрессию рецептора к Fc-фрагменту IgE на базофилах обоих типов, усиливает экспрессию молекул ГКГ класса II на В-клетках и макрофагах. Яв-ляется антагонистом гамма-интерферона. Подавляет продукцию ИЛ-1, ФНО, ИЛ-6, ИЛ-8, ингибирует цитотоксическую активность Т-лимфоцитов, макро-фагов. Относится к антивоспалительным цитокинам. [Дранник Г. Н. Кли-ническая иммунология и аллергология, МИА, Москва 2003г. С. 100].

1.1.1.5. Гамма-интерферон

Интерфероны представляют собой семейство гликопептидов, которые делятся на два типа. [Дранник Г. Н. Клиническая иммунология и аллер-гология, МИА, Москва 2003г. С. 107-109].
Тип 1 в свою очередь подразделяется на альфа - и бета-интерфероны, продуцируемые лейкоцитами и фибробластами соответственно.
Тип 2 интерферонов получил название гамма-интерферона. продуциру-ется активированными Т-лимфоцитами хелперами 1-го типа и ЕК-клетками.
Различают следующие биологические эффекты итерферонов:
а) противовирусный;
б) антипролиферативный (противоопухолевый);
в) иммуномодулирующий;
г) антибактериальный.
Противовирусный эффект интерферонов представлен на схеме 1. Как видно из схемы, связывание интерферона с рецептором индуцирует в клетке три одновременно протекающих процесса, которые заканчиваются:
1) Активацией латентной эндорибунуклеазы, приводящей к раз-рушению вирусной РНК;
2) Подавлением синтеза вирусной матричной РНК;
3) Подавлением синтеза белков вирусной оболочки.
Эти механизмы интегрально реализуют противовирусный эффект, при-водя к подавлению репликации вируса.

Схема 1. Противовирусный эффект интерферона.
Антипролиферативный (противоопухолевый) эффект интерферонов объясняется следующими механизмами:
1. Активацией цитотоксических клеток;
2. Усилением экспрессии опухольассоциированных антигенов;
3. Модуляцией продукции антител;
4. Ингибицией действия опухолевых ростовых факторов;
5. Ингибицией синтеза РНК и белков опухолевой клетки;
6. Замедлением клеточного цикла с переходом в фазу "покоя";
7. Стимуляцией опухолевых клеток к созреванию;
8. Восстановлением сдерживающего контроля за пролиферацией;
9. Торможением образования новых сосудов в опухоли;
10. Ингибицией метастазирования;
11. Биомодуляцией активности цитостатиков: а) изменением метабо-лизма; б) снижением клиренса.
12. Преодоление лекарственной резистентности за счет ингибиции генов множественной лекарственной резистентности.
В настоящее время с помощью генной инженерии получено большое количество интерферонов, которые широко используются для лечения при вирусных и онкологических заболеваниях.
Одним из важнейших биологических эффектов интерферонов является иммуномодулирующий эффект. Установлено, что он опосредуется следую-щими механизмами:
1. Усилением экспрессии антигенов гистосовместимости классов I и II;
2. Регуляцией чувствительности к цитокинам;
3. Активацией цитотоксических эффекторных клеток.
В последние годы показано, что интерфероны обладают также анти-бактериальным эффектом, в основе которого лежит способность интерфе-ронов индуцировать активность некоторых ферментов в пораженной клетке:
1. Индукция индоламин-2,3-дезоксигеназы приводит к снижению внут-риклеточного содержания L-триптофана, что, в свою очередь, является при-чиной гибели бактериальной клетки в связи с нарушением метаболизма;
2. Индукция NO-синтетазы приводит к продукции N0 – мощного бак-терицидного фактора, способствующего разрушению бактериальной клетки. [Дранник Г. Н. Клиническая иммунология и аллергология, МИА, Моск-ва 2003г. С. 107-109].
IFN типа II (иммунный IFN, ИНФ-гамма), представляет собой глико-протеин с молекулярной массой 20-25 кДа и известен как иммунный интер-ферон, кислотолабильный, продуцируется Т-клетками и натуральными кил-лерами в ответ на чужеродные антигены или митогены, причем, его продук-ция сопряжена с бласттрансформацией этих клеток. Хорошими индукторами ИФН-гамма являются антигены таких микроорганизмов, как микобактерии туберкулеза, стафилококки, вирусы гриппа и вирусы герпеса и др., так как все они вызывают бласттрансформацию Т-лимфоцитов. [Young H.A. // Seminars in Virology. 1995. V. 6. P. 175-180.]
Хотя гамма-интерферон был открыт по способности оказывать проти-вовирусный эффект, в дальнейшем выяснилось, что он представляет собой плейотропный лимфокин, обладающий множественным действием на рост и дифференцировку клеток самых разных типов. Например, гамма-интерферон индуцирует дифференцировку миелоидных клеток из костного мозга и клеток хронического миелолейкоза, в результате чего они приобретают Fc-гамма - рецепторы, ферменты, а также функциональные свойства более зрелых мо-ноцитов. Важное и специфичное для интерферона свойство - способность индуцировать экспрессию антигенов MHC класса II на эндотелиальных и разнообразных эпителиальных клетках, а также клетках опухолевых линий. Гамма-интерферон стимулирует и экспрессию антигенов MHC класса I. По-добные эффекты приводят к усилению взаимодействия между иммунными T- лимфоцитами и нелимфоидными клетками, что необходимо, например, для борьбы с вирусной инфекцией.
Гамма-интерферон представляет собой и важнейший фактор, активи-рующий макрофаги; он способствует более эффективному уничтожению макрофагами внутриклеточных микроорганизмов, запуская поврежденные ранее микробицидные механизмы макрофагов и вызывая гибель внутрикле-точных микроорганизмов ( рис. 5 ). [Holter W., Grunow R., Stockinger H., et al.//J.Immunol.-1986.- V.136.-N.6.-P.2171.]


Рис. 5. Активация макрофагов Т - хелперами (кружки - поверхностный микробный антиген; красные квадраты - молекулы MHC класса II , волнистые линии - внутриклеточные паразиты.).
Кроме того, гамма-интерферон действует синергично с клеточным ядом, лимфотоксином, индуцируя экспрессию рецепторов лимфотоксина на клетках мишенях.
Интерферон гамма способен подавить пролиферацию клеток эритро-идного ростка, выработку эритропоэтина почками и высвобождение железа из макрофагов.
Противовирусная активность гамма-ИНФ проявляется при его взаимо-действии с соответствующими рецепторами на поверхности зараженных кле-ток, вследствие чего в этих клетках включаются гены, ответственные за синтез белков и ферментов, препятствующих самовоспроизведению вируса. Тем самым интерферон блокирует биосинтез вирусных частиц в зараженной клетке. На этом свойстве интерферона основано использование его препара-тов в качестве лечебных при вирусных инфекциях.

1.2. Гнойно-воспалительных заболеваниях

1.2.1. Фурункулез

Фурункул (лат. furunculus) – острое гнойно-некротическое воспаление волосяного фолликула и окружающей его соединительной ткани. Вызывает развитие Ф золотистый, реже белый стафилококк. Важную роль в возникно-вении Ф играют экзогенные и эндогенные предрасполагающие факторы. Эк-зогенными факторами являются повреждения кожи (расчесы, ссадины, дер-матит и др.), загрязнение ее частицами пыли, угля и т.д., пиодермия. Эндо-генными – эндокринные нарушения (сахарный диабет, ожирение), нарушение обмена (гиповитаминоз, анемия), алкоголизм, переохлаждение и др. О фу-рункулезе говорят при множественном и рецидивирующем появлении и развитии Ф. Часто фурункулез возникает на фоне сопутствующего сахарного диабета. [Сетдикова Н.Х., Латышева Т.В. Комплексные механизмы раз-вития хронического рецидивирующего фурункулеза и пути их коррек-ции//Иммунология. – 2000.- №3. – С.48-50.]
Фурункул может развиться на любом участке кожи, где имеются воло-сяные фолликулы. Наиболее частая локализации – лицо, кожа шеи, тыла кис-тей, поясницы. Вначале появляется плотный ярко-красного цвета воспали-тельный инфильтрат, возвышающийся над уровнем кожи небольшим кону-сом. Больные отмечают легкий зуд, умеренные боли. По мере развития Ф. инфильтрат увеличивается, нарастает гиперемия, присоединяется перифери-ческий отек. На 3-4-й день в центре инфильтрата появляются некроз и раз-мягчение тканей, которые приобретают зеленоватый цвет, формируется нек-ротический стержень фурункула. В этот период боли резко усиливаются, особенно при локализации в физиологически активной области (например, в области сустава), возможны повышение температуры тела, головная боль, недомогание. При благоприятном течении через 2-3дня гнойно-некротический стержень самостоятельно отторгается с образованием глубо-кой умеренно кровоточащей раны. Еще спустя 2-3дня рана заживает. При стертом течении процесса образуется болезненный инфильтрат без нагноения и некроза. При абсцедирующем Ф. гнойно-некротический процесс рас-пространяется за пределы волосяного фолликула с развитием гнойной полос-ти или флегмоны. Одиночные Ф. обычно не вызывают общей реакции и не дают осложнений, однако у больных сахарным диабетом возможно тяжелое течение процесса. Ф. может осложниться лимфангиитом, регионарным лим-фаденитом, тромбофлебитом. [Кожные болезни//Под ред. Кубанова А.А. – М.:ГЭОТАР Медицина. – 1999г. – 175-184с.]
Ведущими изменениями иммунной системы при ХРФ являются дефек-ты фагоцитарного и гуморального звеньев иммунитета.[А.С. Манько, Н.Х. Сетдикова, Т.В. Латышева, Ю.А. Горностаева, О.М. Котова, Н.М. Голу-бева «Клинико-иммунологическая эффективность серамида у больных хроническим рецидивирующим фурункулезом» //Российский Аллерго-логический Журнал, №5, 2005г]
1.2.2. Остеомиелит

Остеомиелит – воспаление костного мозга, обычно распространяю-щееся на компактное и губчатое вещество кости и надкостницу. [Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М.:Медицина 1994г. С. 485-487]
По этиологическому признаку различают неспецифический О., вызы-ваемый гноеродными микроорганизмами, и специфический, вызываемый специфической микрофлорой. В зависимости от путей проникновения возбу-дителей инфекции в кость выделяют гематогенный (эндогенный) и негемато-генный (экзогенный) остеомиелит. Гематогенный О. возникает в результате заноса по кровеносному руслу возбудителей гнойной инфекции из отдален-ного очага (острый гематогенный и первично-хронический О.). Экзогенный О. вызывается инфекцией, проникающей в кость при ранениях, операциях или за счет непосредственного перехода гнойного воспаления на кость с ок-ружающих органов и тканей. В зависимости от механизма возникновения различают огнестрельный, посттравматический, послеоперационный и кон-тактный остеомиелит. Огнестрельный О. является следствием огнестрельных ранений с повреждением кости. Посттравматический О. развивается при от-крытых переломах. Послеоперационный О. может возникнуть при оператив-ном лечении закрытых переломов, других операциях на костях и чаще связан с нарушением правил асептики.
По клиническому течению О. может быть острым и хроническим (вто-ричным), развивающимся после любого острого неспецифического О. Кроме того, различают первично-хронический О., к которому относят атипичные формы О. (склерозирующий остеомиелит Гарре, альбуминозный остеомиелит Оллье, абсцесс Броди), а также О. при некоторых инфекционных болезнях (туберкулез, сифилис и др.).
Ряд авторов выделяет антибиотический О., возникающий у ослаблен-ных больных в процессе длительного лечения массивными дозами антибио-тиков, и пострадиационный О., связанный с длительным воздействием иони-зирующего излучения.
Возбудителем неспецифического О. могут быть любые микроорганиз-мы, но наиболее часто – аэробные гноеродные микроорганизмы стафилокок-ковой и стрептококковой группы. Более чем в 90% случаев при остром гема-тогенном О. из гноя выделяют золотистый стафилококк. Отмечается увели-чение числа остеомиелитов, обусловленных неклостридиальной анаэробной и грамотрицательной флорой. В редких случаях гематогенный О. имеет грибковую этиологию. [Белохвостикова Т.С., Кирдей Л.Е., Гаврилова Е.Ю., Промтов М.В., Леонова С.Н., Кирдей Е.Г. Коррекция вторичных нарушений иммунной системы при хроническом посттравматическом остеомиелите.//Медицинская иммунология, 2002, т.4, №2, с.228-229.].
При остром гематогенном О. микрофлора из явного или скрытого пер-вичного очага заносится током крови (бактериемия) в длинные трубчатые кости, где в широкой сети сосудов, особенно в области метафиза, замедляется скорость кровотока и микроорганизмы фиксируются в синусах губчатого вещества. При определенных условиях эти очаги могут дать вспышку гной-ного О. Хронический гематогенный О. является следствием острого процесса.
Воспалительный процесс в кости может ограничиться краевой зоной – образующиеся грануляции предотвращают дальнейшее инфицирование ко-стного мозга. При нарушении регенераторных процессов острый О. переходит в хронический. В инфицированной ране осколки костей подвергаются некрозу, становятся источниками нагноения, вокруг них образуются гнойные полости, формируются свищи, что препятствует развитию костной мозоли.
Первично-хронические (атипичные) формы О. развиваются в основном в результате воздействия слабовирулентной стафилококковой микрофлоры.
В начальной стадии острого гематогенного О. развиваются диффузный отек костного мозга и серозное воспаление, которое в дальнейшем сменяется его гнойной инфильтрацией. Процесс, имеющий характер флегмоны, распро-страняется вдоль кости и по направлению к надкостнице. Повышение внут-рикостного давления усугубляет нарушения кровообращения кости, в ре-зультате чего происходят некроз и аутолиз костных перекладин, кортикаль-ного слоя кости, стенок каналов остеонов. Резорбция кости сопровождается появлением в ней мелких дефектов, заполненных гноем, которые сливаются в более крупные фокусы, содержащие секвестры. Тромбофлебит и тромбар-териит мелких сосудов кости полностью лишают питания пораженный ее участок, в результате чего зона некроза кости увеличивается. Надкостница вначале утолщается, а затем отслаивается гноем, который проникает из кост-номозгового канала по костным каналам.
Если поднадкостничная флегмона кости своевременно не вскрыта, то гной прорывается в межмышечное пространство (межмышечная флегмона), переходит на подкожную клетчатку и самопроизвольно вскрывается наружу с образованием свища. Омертвевшие участки кости, находящиеся в полости гнойника, подвергаются отторжению (секвестрации). При ограниченном процессе вблизи компактного вещества кости образуются кортикальные сек-вестры. Они могут находиться поднадкостнично, проникать в мягкие ткани или выходить через свищевой ход наружу. Секвестры, отторгающиеся со стороны эндоста, называют центральными, или внутриполостными. Оттор-жение их происходит в просвет костномозгового канала. При некрозе всей толщи кости, но на ограниченном участке, образуются так называемые про-никающие (перфорирующие) секвестры – один конец такого секвестра нахо-дится в костномозговом канале, а другой – в мягких тканях. В редких случаях при поражении кости по окружности может сформироваться тотальный сек-вестр. Секвестры препятствуют заживлению очага О. и поддерживают воспа-ление, т.к. сохраняющаяся в них инфекция, несмотря на применение анти-биотиков широкого спектра, подавляет активность тканевых ферментов. Возможность «вживления» или рассасывания секвестра, по мнению боль-шинства исследователей, мало вероятна.
Одновременно с воспалительно-некротическими изменениями в кост-ной ткани происходят репаративные процессы. Участки некроза замещаются молодой костной тканью. При ограниченных некрозах кости, своевременном и комплексном лечении, преимущественно у больных молодого возраста за-болевание может закончиться выздоровлением с восстановлением костной структуры. Но приблизительно у 1/3 больных острый остеомиелитический процесс переходит в хронический.
Атипичные формы О. характеризуются вялотекущим воспалительным поражением костей с преобладанием склеротических процессов, что приводит к сужению или полному закрытию костномозгового канала, веретенообразно-му утолщению диафиза кости, меньшей выраженности некроза кости и редкому образованию секвестров. Одной из таких форм является склерози-рующий остеомиелит Гарре, при котором отмечают выраженное утолщение кости, отсутствие свищей и секвестров. Преобладают гиперостоз и остео-склероз с концентрическим сужением костномозгового канала. При альбу-минозном остеомиелите Оллье морфологическую основу составляет неболь-шой деструктивный очаг в кортикальном слое кости, содержащий серозный или слизисто-белковый экссудат. Иногда имеются небольшие секвестры.
Остеомиелит как осложнение некоторых инфекционных болезней – сепсиса, брюшного тифа, бруцеллеза, туберкулеза, сифилиса – обладает спе-цифическими для каждого из этих заболеваний морфологическими призна-ками. [Керко О.В., Гусева В.Н., Потапенко Е.И., Якунова О.А. и др. Роль иммунологических показателей при туберкулезе и остеомиелите позво-ночника//Медицинская иммунология. – 2005. - №2-3. С.243-244]
В доступной нам литературе не обнаружено данных об исследовании уровня цитокинов ИЛ-4, γИФН при хроническом остеомиелите и хрониче-ском рецидивирующем фурункулезе.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы исследования

Обследовано 49 больных в возрасте от 20 до 55 лет с ГВЗ различной локализации: из них 34 – с хроническим рецидивирующим фурункулезом и 15 – с хроническим остеомиелитом в стадии обострения. Клиническое обсле-дование больных включало тщательный сбор аллергоанамнеза.
Контрольную группу составили 10 доноров без гнойно-воспалительных заболеваний, сопоставимые по полу и возрасту.
Объектом исследования служила сыворотка крови. Забор крови произ-водился с 8.00 до 10.00 часов.
Кровь центрифугировали при 1500 об/мин в течении 15 мин. Из экспе-римента исключалась гемолизированная и хилёзная (содержащая жировые включения) сыворотка.
Полученную сыворотку использовали в качестве источника ИЛ-4 и γ-интерферона.

2.2. Методы исследования

Исследование проводилось на базе лаборатории иммунологии и аллер-гологии ГОУ ДПО Пензенский институт усовершенствования врачей Росзд-рава.

2.2.1. Метод определения уровня интерлейкина-4 в сыворотке кро-ви
Для определения уровня ИЛ-4 использовался метод твердофазного им-муноферментного анализа‚ с использованием набора реактивов "ИФА-IL-4" фирмы ВЕКТОР-БЕСТ. Набор "ИФА-IL-4" предназначен для определения концентрации ИЛ-4 в сыворотке крови в клинических, диагностических и научно-исследовательских лабораториях.
Состав набора:
■ комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов с рамкой с иммо-билизованными на внутренней поверхности лунок моноклональными анти-телами к интерлейкину-4, маркирован "Стрипы с моноклональными антите-лами";
■ 7 калибровочных проб, содержащих известные количества интерлей-кина-4 – 0; 12,5; 25; 50; 100; 200 и 400пг\мл, лиофилизованные препараты;
■ аналитический буферный раствор, маркирован "Буфер А", 1 флакон;
■ концентрированный раствор антител анти-IL-4-биотин, маркирован "Антитела", 1 флакон;
■ концентрированный раствор конъюгата авидин-пероксидаза, марки-рован "Конъюгат Е", 1 флакон;
■ концентрированный буферный раствор для промывок лунок, марки-рован "Буфер Р", 1 флакон;
■ субстратный буфер, маркирован "Буфер С", 1 флакон;
■ 10% кислота, маркирована "Стоп-реагент", 1 флакон;
■ раствор тетраметилбензидина, маркирован " ТМБ";
Дополнительные материалы и оборудование:
■ автоматические одноканальные пипетки с изменяемым объемом от-бора жидкостей: от 0,005 до 0,01 мл; от 0,05 до 0,25 мл; от 0,2 до 1 мл; от 1 до 5 мл;
■ одноканальная полуавтоматическая пипетка, позволяющая отбирать объемы жидкости до 0,3 мл.
■ прибор для встряхивания рамки со стрипами (шейкер), позволяющий производить встряхивание с амплитудой колебания 3-4мм и частотой 4-6 Гц при комнатной температуре (+16-25°С), либо статируемый шейкер, позво-ляющий производить встряхивание в том же режиме при температуре +37°С;
■ спектрофотометр, позволяющий измерить оптическую плотность раствора в стрипах при длине волны 450нм;
■ цилиндры, позволяющие отмерять 10 и 100 мл;
■ два стеклянных стакана емкостью 20 мл и один - 150 мл;
■ дистиллированная вода.
Принцип работы набора.
В наборе "ИФА-IL-4" использован "сэндвич" вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к ин-терлейкину-4. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя по-верхность лунок), второе конъюгировано с биотином. На первой стадии ана-лиза IL-4, содержащийся в калибровочных и исследуемых пробах связывается с антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок. На второй стадии анализа иммобилизованный IL-4 взаимодействует с конъюга-том вторых антител – биотин. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству IL-4 в исследуемом образце. На последней ста-дии анализа в лунки вносят авидин-пероксидазу.
Во время инкубации с субстратной смесью происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству свя-завшихся меченых антител. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочной кривой рассчитывается концентрация IL-4 в определяемых образцах.
Подготовка реагентов к анализу
• Калибровочные пробы. Во флаконы с калибровочными пробами добавить по 1,0 мл дистиллированной воды, выдержать в течение 20мин. И затем тщательно перемешать до полного растворения, избегая пенообразова-ния. Хранить при температуре +4...6° С в течение трех суток; при возможно-сти более длительного хранения разлить по 220 мкл (чтобы избежать повтор-ного оседания) и хранить при температуре -20° С не более месяца.
• Стрипы. Вскрыть и установить на рамку необходимое количество стрипов. Оставшиеся стрипы хранить в герметично закрытом пакете из фоль-гированного полиэтилена при температуре
• Сывороточный буфер. В стакан с 480 мл дистиллированной воды добавить содержимое флакона с маркировкой"Буфер Р". Тщательно переме-шать, избегая пенообразования. Xранить промывочный буфер при темпера-туре +2…8°С.
• Буфер А. Готов к использованию. Хранить закрытым при темпе-ратуре +2…6° С.
• Набор антител анти-IL-4-биотин. В зависимости от количества используемых стрипов подготовить необходимый объем однократного рас-твора антител путем смешивания 40 мкл концентрированного антител с 1 мл промывочного буфера из расчета на один стрип. Однократный раствор анти-тел должен быть использован в течение часа, длительному хрипению не под-лежит.
• Конъюгат Е. авидин-пероксидаза. В зависимости от количества используемых стрипов подготовить необходимый объем однократного рас-твора конъюгата путем смешивания 40 мкл концентрированного конъюгата Е с 1 мл промывочного буфера из расчета на один стрип. Однократный раствор конъюгата Е должен быть использован в течение часа, длительному хранению не подлежит.
• Субстратная смесь приготовляется непосредственно перед упот-реблением.
• "Стоп-реагент" готов к использованию.
Проведение анализа:

1 Внести во все лунки по 0,1 мл "Буфер А". Расход реагентов в табл.1
2 В соответствующие лунки по 0,1 мл калибровочных проб или исследуемой сыворотки, внесение образцов не должно занимать более 15 мин
3 Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 2 ч со встряхиванием
4 Удалить содержимое лунок декантированием и промыть лунки три раза. При промывке во все лунки добавить по 0,25 мл промывочного буфера
5 На шейкере в течение 5-10 сек с последующим декантированием. При каждом декантировании тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в положении по фильтровальной бумаге
6 Внести во все лунки по 0,1 мл раствора антител
7 Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 1 часа со встряхиванием
8 Лунки промыть
9 Внести во все лунки по 0,1 мл раствора конъюгата Е
10 Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 30 минут со встряхиванием
11 Лунки промыть
12 Перед окраской стрипы сполоснуть дистиллированной водой для более полного удаления не связавшего конъюгата
13 Внести во все лунки по 0,1 мл субстратной смеси и инкубировать стрипы в темноте в течение 15-20 мин в зависимости от степени развития окраски
14 Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и суб-стратную смесь, по 0,05 мл "Стоп-реагента" для остановки ферментной реакции, встряхивать на шейкере 5мин
15 Измерить оптическую плотность в лунках при длине волны 450 нм
16 Построить для калибровочных проб график зависимости оптической плотности в единицах оптической плотности (ОП) от концентрации IL-4 в пг\мл.
17 Определить содержание IL-4 в пробах по калибровочному графику

Таблица 2. Расход реагентов для проведения анализа
Количество ис-пользуемых стрипов
шт Буфер А
мл Раствор ан-тител
мл Конъюгат
мл Буфер Р
мл Субстратная смесь
Раствор ТМБ
мл Буфер С
мл
2 2 2 2 50 0,4 2
3 3 3 3 75 0,6 3
4 4 4 4 100 0,8 4
5 5 5 5 125 1,0 5
6 6 6 6 150 1,2 6
7 7 7 7 175 1,4 7
8 8 8 8 200 1,6 8
9 9 9 9 225 1,8 9
10 10 10 10 250 2,0 10
11,12 12 12 12 300 2,0 10

Пример калибровочных кривых для каждого конкретного набора при-водиться в Паспорте контроля качества (Рис. 6).
Рис. 6. Калибровочная кривая (ОБРАЗЕЦ) для определения ИЛ-4

2.2.2. Метод определения уровня гамма-интерферона в сыворотке крови

Для определения уровня гамма-интерферона использовался метод твердофазного иммуноферментного анализа‚ с использованием набора реак-тивов "ИФА-IFN-gamma" фирмы ВЕКТОР-БЕСТ. Набор "ИФА-IFN-gamma" предназначен для определения концентрации γИФН в сыворотке крови в клинических, диагностических и научно-исследовательских лабораториях.
Состав набора:
■ комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов с рамкой с иммо-билизованными на внутренней поверхности лунок моноклональными анти-телами к интерлейкину-4, маркирован "Стрипы с моноклональными антите-лами";
■ 7 калибровочных проб, содержащих известные количества гамма-интерферона – 0; 50; 100; 300; 500; 1000 и 2000пг\мл, лиофилизованные пре-параты;
■ аналитический буферный раствор, маркирован "Буфер А", 1 флакон;
■ концентрированный раствор антител IFN-gamma-биотин, маркирован "Антитела", 1 флакон;
■ концентрированный раствор конъюгата авидин-пероксидаза, марки-рован "Конъюгат Е", 1 флакон;
■ концентрированный буферный раствор для промывок лунок, марки-рован "Буфер Р", 1 флакон;
■ субстратный буфер, маркирован "Буфер С", 1 флакон;
■ 10% кислота, маркирована "Стоп-реагент", 1 флакон;
■ раствор тетраметилбензидина, маркирован " ТМБ";
Дополнительные материалы и оборудование:
■ автоматические одноканальные пипетки с изменяемым объемом от-бора жидкостей: от 0,005 до 0,01 мл; от 0,05 до 0,25 мл; от 0,2 до 1 мл; от 1 до 5 мл;
■ одноканальная полуавтоматическая пипетка, позволяющая отбирать объемы жидкости до 0,3 мл.
■ прибор для встряхивания рамки со стрипами (шейкер), позволяющий производить встряхивание с амплитудой колебания 3-4мм и частотой 4-6 Гц при комнатной температуре (+16-25°С), либо статируемый шейкер, позво-ляющий производить встряхивание в том же режиме при температуре +37°С;
■ спектрофотометр, позволяющий измерить оптическую плотность раствора в стрипах при длине волны 450нм;
■ цилиндры, позволяющие отмерять 10 и 100 мл;
■ два стеклянных стакана емкостью 20 мл и один - 150 мл;
■ дистиллированная вода.
Принцип работы набора.
В наборе "ИФА-IFN-gamma " использован "сэндвич" вариант твердо-фазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта ис-пользованы два моноклональных антитела с различной эпитопной специфич-ностью к гамма-интерферону. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с биотином. На пер-вой стадии анализа γИФН, содержащийся в калибровочных и исследуемых пробах связывается с антителами, иммобилизованными на внутренней по-верхности лунок. На второй стадии анализа иммобилизованный γИФН взаи-модействует с конъюгатом вторых антител – биотин. Количество связавше-гося конъюгата прямо пропорционально количеству γИФН в исследуемом образце. На последней стадии анализа в лунки вносят авидин-пероксидазу.
Во время инкубации с субстратной смесью происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству свя-завшихся меченых антител. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочной кривой рассчитывается концентрация γИФН в определяемых образцах.
Подготовка реагентов к анализу
• Калибровочные пробы. Во флаконы с калибровочными пробами добавить по 1,0 мл дистиллированной воды, выдержать в течение 20мин. И затем тщательно перемешать до полного растворения, избегая пенообразова-ния. Хранить при температуре +4...6° С в течение трех суток; при возможно-сти более длительного хранения разлить по 220 мкл (чтобы избежать повтор-ного оседания) и хранить при температуре -20° С не более месяца.
• Стрипы. Вскрыть и установить на рамку необходимое количество стрипов. Оставшиеся стрипы хранить в герметично закрытом пакете из фоль-гированного полиэтилена при температуре
• Сывороточный буфер. В стакан с 480 мл дистиллированной воды добавить содержимое флакона с маркировкой"Буфер Р". Тщательно переме-шать, избегая пенообразования. Xранить промывочный буфер при темпера-туре +2…8°С.
• Буфер А. Готов к использованию. Хранить закрытым при темпе-ратуре +2…6° С.
• Набор антител анти- γИФН-биотин. В зависимости от количества используемых стрипов подготовить необходимый объем однократного рас-твора антител путем смешивания 40 мкл концентрированного антител с 1 мл промывочного буфера из расчета на один стрип. Однократный раствор анти-тел должен быть использован в течение часа, длительному хрипению не под-лежит.
• Конъюгат Е. авидин-пероксидаза. В зависимости от количества используемых стрипов подготовить необходимый объем однократного рас-твора конъюгата путем смешивания 40 мкл концентрированного конъюгата Е с 1 мл промывочного буфера из расчета на один стрип. Однократный раствор конъюгата Е должен быть использован в течение часа, длительному хранению не подлежит.
• Субстратная смесь приготовляется непосредственно перед упот-реблением.
• "Стоп-реагент" готов к использованию.
Проведение анализа:
1 Внести во все лунки по 0,1 мл "Буфер А". Расход реагентов в табл.1
2 В соответствующие лунки по 0,1 мл калибровочных проб или исследуемой сыворотки, внесение образцов не должно занимать более 15 мин
3 Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 2 ч со встряхиванием
4 Удалить содержимое лунок декантированием и промыть лунки три раза. При промывке во все лунки добавить по 0,25 мл промывочного буфера
5 На шейкере в течение 5-10 сек с последующим декантированием. При каждом декантировании тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в положении по фильтровальной бумаге
6 Внести во все лунки по 0,1 мл раствора антител
7 Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 1 часа со встряхиванием
8 Лунки промыть
9 Внести во все лунки по 0,1 мл раствора конъюгата Е
10 Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 30 минут со встряхиванием
11 Лунки промыть
12 Перед окраской стрипы сполоснуть дистиллированной водой для более полного удаления не связавшего конъюгата
13 Внести во все лунки по 0,1 мл субстратной смеси и инкубировать стрипы в темноте в течение 15-20 мин в зависимости от степени развития окраски
14 Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и суб-стратную смесь, по 0,05 мл "Стоп-реагента" для остановки ферментной реакции, встряхивать на шейкере 5мин
15 Измерить оптическую плотность в лунках при длине волны 450 нм
16 Построить для калибровочных проб график зависимости оптической плотности в единицах оптической плотности (ОП) от концентрации γИФН в пг\мл.
17 Определить содержание γИФН в пробах по калибровочному графику


Таблица 3. Расход реагентов для проведения анализа
Количество ис-пользуемых стрипов
шт Буфер А
мл Раствор ан-тител
мл Конъюгат
мл Буфер Р
мл Субстратная смесь
Раствор ТМБ
мл Буфер С
мл
2 2 2 2 50 0,4 2
3 3 3 3 75 0,6 3
4 4 4 4 100 0,8 4
5 5 5 5 125 1,0 5
6 6 6 6 150 1,2 6
7 7 7 7 175 1,4 7
8 8 8 8 200 1,6 8
9 9 9 9 225 1,8 9
10 10 10 10 250 2,0 10
11,12 12 12 12 300 2,0 10

Пример калибровочных кривых для каждого конкретного набора при-водиться в Паспорте контроля качества (Рис. Б).
Рис. 7. Калибровочная кривая (ОБРАЗЕЦ) для определения γИФН

2.2.3. Статистическая обработка результатов исследования

Результаты подвергали статистической обработке с использованием t-критерия Стьюдента, различия считали достоверными при p<0,05 [Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа,1990.352с.].


ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

До недавнего времени в России изучением цитокинов занимались не-многочисленные группы исследователей, так как биологические методы ис-следования очень трудоёмки, а импортные иммунохимические наборы весьма дороги. С появлением доступных отечественных иммуноферментных наборов все больший интерес к изучению цитокинового профиля проявляют практикующие врачи.
В настоящий момент диагностическая значимость оценки уровня цито-кинов заключается в констатации самого факта повышения или понижения их концентрации у данного больного с конкретным заболеванием. Причём для оценки тяжести и прогнозирования течения заболевания целесообразно определять концентрацию как противо-, так и провоспалительных цитокинов.
Известно‚ что цитокинам принадлежит важная роль в генезе развития воспалительной реакции при ГВЗ. В частности‚ ИЛ-4 – антивоспалительный цитокин – ингибирует цитотоксическую активность Т-лимфоцитов, макрофа-гов‚ участвует в переключении синтеза IgG1 на синтез IgG4 и IgE. Совместно с другими цитокинами ИЛ-4 способствует пролиферации тканевых базофи-лов. Антагонистом ИЛ-4 является гамма-интерферон – важнейший фактор, активирующий макрофаги; он способствует более эффективному уничтоже-нию макрофагами внутриклеточных микроорганизмов, запуская поврежден-ные ранее микробицидные механизмы макрофагов и вызывая гибель внутри-клеточных микроорганизмов.
Маркером течения ГВЗ считается изменение уровня иммуноглобулина Е [Перетня Н. Н.‚ Сенькова Л. В.‚ Добродеев К. Г. Капутин С. Л. и др. К вопросу о роли IgE// Объединённый иммунологический форум: Тезисы. – Екатеринбург.- 2004.-С. 119]. В частности клинически неблагоприятным показателем является повышение уровня IgE при ГВЗ . В связи с этим‚ инте-ресным представляется исследование корреляционных взаимосвязей уровней интерлейкина 4 и гамма-интерферона с показателями общего иммуноглобу-лина Е в сыворотке крови больных с ГВЗ.

3.1. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных с различным уровнем имму-ноглобулина Е при хроническом рецидивирующем фурункулезе

Бактериальные инфекции кожи являются важной клинической пробле-мой ввиду их распространенности во всем мире и недостаточной эффектив-ности терапии этих заболеваний. Наиболее часто встречающиеся инфекци-онные заболевания кожи включают фолликулиты, фурункулы и карбункулы. Факторами предрасположенности к возникновению рецидивирующего фу-рункулеза (РФ) являются инфицированные раны, нарушение правил гигиены, диабет, алкоголизм, окклюзивная косметика, тесная одежда, общее ослабле-ние организма, потертости, перегрев, контакт с химическими агентами, не-адекватное лечение кожных повреждений, использование стероидных гормо-нов. Причины развития ХРФ не всегда понятны. Как правило при изучении особенностей рецидивирующего фурункулеза, отмечается наличие аллерги-ческого компонента в воспалении при фурункулезе у лиц старшего возраста, что сопровождается повышением общего IgE. Кроме того‚ при ХРФ, как при всякой рецидивирующей инфекции, можно предположить наличие нарушений иммунологической реактивности.
В нашей работе обследовано 34 пациента с ХРФ. Эти пациенты были сформированы в 2 группы‚ в зависимости от уровня IgE: первую группу со-ставили 14 больных с повышенным уровнем IgE, вторую – 20 пациентов с нормальными значениями указанного иммуноглобулина. За дискриминаци-онный уровень принимались показатели иммуноглобулина Е – 130-150 МЕ/мл. Контрольную группу составили 10 человек – доноры без ГВЗ.

3.1.1. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 в сыворот-ке крови у больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом
Результаты исследования уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови у больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом приведены на рис. 8 и табл. 1 (Приложение 1).
Согласно полученным результатам достоверное повышение уровня ИЛ-4‚ по сравнению с контрольной группой‚ отмечалось как у больных с по-вышенными‚ так и нормальными значениями общего иммуноглобулина Е.

Концентрация ИЛ-4 у больных с высокими значениями общего имму-ноглобулина Е (выше 150 МЕ/мл) превышала показатели контрольной группы в 10 раз (р< 0,05). Концентрация ИЛ-4 у больных с нормальными значениями сывороточного иммуноглобулина Е (130 МЕ/мл) превышала показатели контрольной группы в 7 раз (р< 0,01). Полученные результаты свидетель-ствуют о вовлечении ИЛ-4 в формирование иммунного ответа при развитии ХРФ. Однако‚ эти изменения не зависели от показателей общего иммуногло-булина Е в обследуемой группе больных с ХРФ.

3.1.2. Результаты исследования уровня гамма-интерферона в сы-воротке крови у больных с хроническим рецидивирующим фурункуле-зом

Результаты исследования уровня гамма-интерферона в сыворотке крови у больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом приведены на рис. 9 и табл. 1 (Приложение 1).
Полученные результаты показали‚ что изменения уровня ИФНγ как у больных с повышенными‚ так и нормальными значениями общего иммуног-лобулина Е‚ достоверно не отличались от показателей концентрации гамма-интерферона контрольной группы.

Вероятно‚ полученные результаты свидетельствуют‚ что гамма-интерферон не участвует в формировании ответной реакции организма при развитии ХРФ. Кроме того‚ показатели концентрации гамма-интерферона в обследуемой группе больных с ХРФ не зависели от уровня сывороточного иммуноглобулина Е.

3.2. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 и гамма-интерферона в сыворотке крови больных с различным уровнем имму-ноглобулина Е при хроническом остеомиелите

Характер и специфика иммунологической реактивности при хрониче-ских остеомиелитах‚ определяется морфологической деструкцией кости и окружающих мягких тканей в зоне воспаления, приобретающих на опреде-ленном этапе воспаления свойства аутоантигенов. Развивающиеся в этих ус-ловиях иммунодефицит и дисбаланс компонентов иммунного ответа снижают возможности специфической и неспецифической защиты, что способствует персистенции микробных агентов и развитию порочного круга, обу-словливающего поддержание патологического процесса. Известно, что неко-торые бактерии способны выключать процессы антителообразования как прямым, так и опосредованным (через индукцию факторов, препятствующих активации Т-клеток) путем, и тем самым снижать общий уровень иммунного ответа. Немаловажную роль при этом играют цитокины, которые, будучи ме-диаторами иммунитета, способны менять характер течения гнойно-воспалительного процесса. Естественно, что при таком сложном механизме иммунорегуляции течение гнойного процесса зависит не только от иммуно-генного потенциала инфицирующих микроорганизмов, но и от исходного иммунного статуса организма хозяина [Белохвостикова Т.С., Кирдей Л.Е., Гаврилова Е.Ю., Промтов М.В., Леонова С.Н., Кирдей Е.Г. Коррекция вторичных нарушений иммунной системы при хроническом посттрав-матическом остеомиелите./Медицинская иммунология, 2002, т.4, №2, с.228-229.].
В нашей работе обследовано 15 пациентов с хроническим остеомиели-том. Эти пациенты были сформированы в 2 группы‚ в зависимости от уровня IgE: первую группу составили 10 больных с повышенным уровнем IgE (выше 150МЕ/мл), вторую – 5 пациентов с нормальными значениями указанного иммуноглобулина (130 МЕ/мл). За дискриминационный уровень принимались показатели иммуноглобулина Е – 130-150 МЕ/мл. Контрольную группу составили 10 человек – доноры без ГВЗ.

3.2.1. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 в сыворот-ке крови у больных с хроническим остеомиелитом

Результаты исследования уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови у больных с хроническим остеомиелитом приведены на рис. 10 и табл. 2 (При-ложение 2).
Согласно полученным результатам достоверное повышение уровня ИЛ-4‚ по сравнению с контрольной группой‚ отмечалось как у боль-ных с повышенными‚ так и нормальными значениями общего иммуноглобу-лина Е.

Концентрация ИЛ-4 у больных с высокими значениями общего имму-ноглобулина Е (выше 150 МЕ/мл) превышала показатели контрольной группы в 8 раз (р<0,01). Концентрация ИЛ-4 у больных с нормальными значениями сывороточного иммуноглобулина Е (до 130 МЕ/мл) превышала показатели контрольной группы в 8,7 раз (р<0,05). Полученные результаты сви-детельствуют о вовлечении ИЛ-4 в формирование иммунного ответа при раз-витии хронического остеомиелита. Однако‚ эти изменения не зависели от по-казателей общего иммуноглобулина Е в обследуемой группе больных с хро-ническим остеомиелитом.

3.2.2. Результаты исследования уровня гамма-интерферона в сы-воротке крови у больных с хроническим остеомиелитом

Результаты исследования уровня гамма-интерферона в сыворотке крови у больных с хроническим остеомиелитом приведены на рис. 11 и табл. 2 (Приложение 2).
Согласно полученным результатам достоверное повышение уровня ИФНγ‚ по сравнению с контрольной группой‚ отмечалось как у боль-ных с повышенными‚ так и нормальными значениями общего иммуноглобу-лина Е.

Концентрация гамма-интерферона у больных с высокими значениями общего иммуноглобулина Е (выше 150 МЕ/мл) превышала показатели кон-трольной группы в 3,5 раза (р<0,05). Концентрация гамма-интерферона у больных с нормальными значениями сывороточного иммуноглобулина Е (до 130 МЕ/мл) превышала показатели контрольной группы в 3 раза (р<0,05). Полученные результаты свидетельствуют о вовлечении гамма-интерферона в формирование иммунного ответа при развитии хронического остеомиелита. Однако‚ эти изменения не зависели от показателей общего иммуноглобулина Е в обследуемой группе больных с хроническим остеомиелитом.

 



ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Гнойно-воспалительные заболевания остаются актуальной проблемой современной медицины. При многочисленных клинико-лабораторных на-блюдениях выявлено, что при ГВЗ происходят изменения в иммунологиче-ской системе организма. [Панченко М. К., Вертигора И.П., Грицай Н. П. Комплексное лечение больных с хроническим остеомиелитом с приме-нением костной пластики // Вестн. хир. – 1988. –№10. –С.42-46 Пине-гин Б. Ф., Юдина Т. И., Карсанова М. И. Общие вопросы иммунитета, иммунодиагностики и иммунотерапии на модели хирургических ин-фекций // Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. –М.,1998. –С 10-178 Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Вторичные иммунодефициты: клиника, диагностика, лечение // Иммунология.-1999. -№2. –С.14-17 ]
В последние годы, благодаря развитию методов количественного опре-деления уровней продукции цитокинов, был достигнут значительный про-гресс в понимании роли некоторых цитокинов в норме и при патологии. Наиболее оптимальными для оценки уровней цитокинов являются иммуно-ферментные методы, которые высокоспецифичны, просты и быстры в испол-нении. Применение диагностических иммуноферментных тест-систем для оценки цитокинового статуса, как на местном, так и на системном уровнях при различных патологиях является существенным дополнением к понима-нию патогенеза заболеваний. Изучение уровней цитокинов позволяет полу-чить информацию о функциональной активности различных типов иммуно-компетентных клеток; о тяжести воспалительного процесса, его переходе на системный уровень и прогнозе, о соотношении процессов активации Т-хелперов 1 и 2-типов, о стадии развития ряда аллергических и аутоиммунных заболеваний. Оценка уровней цитокинов, в частности, с использованием им-муноферментных диагностических тест-систем позволяет по-новому подойти к изучению состояния иммунной системы организма в клинической практике. Сейчас практически невозможно назвать патологию, которая не была бы предметом изучения цитокинов. [Демьянов А.В., Котов А.Ю., Симбирцев А.С. Диагностическая ценность исследования уровней цитокинов в кли-нической практике // Цитокины и воспаление, 2003, Т. 2, № 3, с. 20-35)]
Цитокинам принадлежит важная роль в развитии и течении заболеваний различных органов и систем.
В настоящее время идентифицировано более 100 цитокинов (Приложе-ние 3), и их число продолжает увеличиваться.
Цитокины обеспечивают передачу сигнала, обмен информацией между клетками внутри одного органа, связь между органами и системами, как в физиологических условиях, так и действии различных патогенных факторов – инфекционных микроорганизмов, механических, термических, химических травм. У здоровых людей содержание цитокинов минимально, они выявля-ются лишь в следовых количествах.
При патологических состояниях общее число и содержание отдельных цитокинов резко возрастает.
Индукторами повышенного синтеза цитокинов являются инфекционные микроорганизмы (вирусы, бактерии), продукты их жизнедеятельности, токсины, метаболиты, а также измененные, модифицированные клетки соб-ственного организма, некоторые белки растительного происхождения, пище-вые, лекарственные аллергены и др.
[Симбирцев А.С. Цитокины – новая система регуляции защитных реакций организма //Цитокины и воспаление, 2002, № 1]
Цитокины могут быть выделены в новую самостоятельную систему ре-гуляции основных функций организма, существующую наряду с нервной и эндокринной системами регуляции и связанную в первую очередь с поддер-жанием гомеостаза при внедрении патогенов и нарушении целостности тка-ней.

4.1. Интерлейкин-4 и гамма-интерферон при хроническом
рецидивирующем фурункулезе

Бактериальные инфекции кожи являются важной клинической пробле-мой ввиду их распространенности во всем мире и недостаточной эффектив-ности терапии этих заболеваний.
ХРФ – множественное и рецидивирующее появление фурункулов, ост-рое гнойно-некротическое воспаление волосяного фолликула, являющееся бактериальной инфекцией.
При иммунологическом обследовании больных ХРФ обнаруживаются изменения в иммунной системе:
- нарушение фагоцитарного звена (снижение фагоцитарного индекса, снижение бактерицидности нейтрофилов);
- нарушение гуморального звена (гипогаммаглобулинемия, снижение аффинности анти-ОАД-антител, нарушение цитокинового баланса);
- нарушение клеточного звена (лейкопения, снижение CD3+, CD4+, CD21+-лимфоцитов).
Именно цитокиновому дисбалансу, по нашему мнению, отводится одна из ключевых ролей в генезе формирования хронизации патологии кожных ин-фекций.
Содержание цитокинов в периферической крови определяли в группе 29 пациентов с ХРФ. В зависимости от уровня IgE сформированы 2 группы: первую группу составили 12 больных с повышенным уровнем IgE, вторую – 17 пациентов с нормальными значениями указанного иммуноглобулина. Контрольную группу составили 10 доноров, без ГВЗ сопоставимых по полу и возрасту. Клиническое обследование больных включало тщательный сбор аллергоанамнеза.
При изучении уровня сывороточного IgE у больных с ХРФ получены следующие результаты: концентрация IgE была выше верхней границы нормы (130МЕ/мл) в 41% случаев. Разброс показателей повышенного уровня IgE составил от 150 МЕ/мл до значений, превышающих 1000МЕ/мл.
Известно, что повышенный уровень общего IgE является маркером ал-лергических реакций или причиной его повышения являются внешние воз-действия – паразитарные инфекции. При клиническом обследовании пациен-тов с ХРФ и повышенным уровнем IgE сопутствующая аллергопатология была выявлена в 44% случаев. При этом в 7,5% был выявлен поллиноз, в 13% - аллергодерматозы, в 5,5% - респираторные аллергозы, в 3,7% - крапивница, в 11% - лекарственная сенсибилизация. Неотягощенный аллергоанамнез от-мечен в 58% случаев.
Также в сыворотке крови больных ХРФ с повышенным уровнем IgE обнаружены антитела к следующим гельминтам: описторхисам, трихинеллам, токсокарам и эхинококку.
Таким образом, можно считать, что были установлены этиологические факторы повышения сывороточного IgE.
В настоящий момент диагностическая значимость оценки уровня цито-кинов заключается в констатации самого факта повышения или понижения их концентрации у данного больного с конкретным заболеванием. Причём для оценки тяжести и прогнозирования течения заболевания целесообразно определять концентрацию как противо-, так и провоспалительных цитокинов в динамике развития патологии. Например, содержание цитокинов в перифе-рической крови определяется сроками обострения, отражает динамику пато-логического процесса‚ в частности при ГВЗ.
В нашей работе мы определяли концентрацию двух цитокинов – ин-терлейкина-4 и гамма-интерферона – с помощью твердофазного иммунофер-ментного. Оба исследуемых цитокина участвуют в активации и развитии им-мунного реагирования при инфекционно-воспалительных заболеваниях бак-териальной природы. Эти цитокины являются антагонистами по механизму действия. По современным данным, ИЛ-4 в комплексе с гамма - интерферо-ном является ключевым фактором, определяющим тип иммунитета [Кетлин-ский С.А. // Роль Т-хелперов типов 1и 2 в регуляции клеточного и гумораль-ного иммунитета / Иммунология, 2002. - том. 23. - № 2. - С.77 - 79. ]
Интерлейкин-4 – цитокин, отвечающий за активность гуморального звена. Он участвует не только в развитии провоспалительных реакций, но и играет значительную роль в процессах хронизации. [Пекарева Н. А., Чу-прова А. В., Шваюк А. П., Горбенко О. М., Обухова О. О., Трунов А. Н. Сравнительный анализ баланса цитокинов в сыворотке крови и моче у детей с хроническим пиелонефритом в стадии клинической ремиссии // Аллергология и иммунология, том 8, №1, 2007, С. 132-133]
В наших исследованиях при анализе уровня сывороточного ИЛ-4 было выявлено повышение концентрации при ХРФ в группах больных как с по-вышенным уровнем иммуноглобулина Е (выше 150 МЕ/мл), так и с нормаль-ным уровнем (130 МЕ/мл) указанного иммуноглобулина. Результаты иссле-дования уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови у больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом приведены на рис. 8 и табл. 1 (Приложение 1).
Нами был сделан вывод, что повышение уровня интерлейкина-4 во время ХРФ отражает участие этого цитокина в процессе воспаления.
Известно‚ что ведущими изменениями иммунной системы при ХРФ являются дефекты фагоцитарного и гуморального звеньев иммунитета.[А.С. Манько, Н.Х. Сетдикова, Т.В. Латышева, Ю.А. Горностаева, О.М. Кото-ва, Н.М. Голубева «Клинико-иммунологическая эффективность серами-да у больных хроническим рецидивирующим фурункулезом» //Российский Аллергологический Журнал, №5, 2005г]. Вероятно‚ что об-наруженное повышение концентрации ИЛ-4 является свидетельством уменьшения антигенпрезентирующую и цитокинпродуцирующую активность макрофагов при ХРФ.
Вместе с тем в обеих группах больных не выявлено корреляции уровня сывороточного IL4 с уровнем общего IgE. Вероятно, отсутствие корреляции обусловлено межклеточным характером действия IL4 и различной кинетикой синтеза указанных субстанций.
Не исключено‚ что обнаруженное в нашем исследовании повышение уровня сывороточного ИЛ-4 при ХРФ может способствовать подавлению ос-вобождения цитокинов воспаления (ИЛ-1, ИЛ-8), а также продукции цитоки-нов ТН-1-лимфоцитами (ИЛ-2, гамма-ИНФ и др.).
ТН-1-лимфоциты – это‚ клекти-продуценты гамма-ИНФ. ИФНγ –важнейший эндогенный иммуномодулятор, способный активировать Т-клеточное звено иммунной системы и клеточную цитотоксичность. Повыше-ние уровня ИФНγ может способствовать повышению возможностей специ-фической и неспецифической защиты организма‚ и‚ ограничению развития воспаления при ХРФ.
В ходе исследования было выявлено, что изменения уровня ИФНγ как у больных с повышенными‚ так и нормальными значениями общего имму-ноглобулина Е при ХРФ‚ достоверно не отличались от показателей концен-трации гамма-интерферона контрольной группы (рис. 9 и табл. 1 (Приложе-ние 1). Поскольку известно‚ что продукция ИФНγ подавляется ИЛ-4‚ то‚ ве-роятно‚ что обнаруженный в обследуемой группе пациентов с ХРФ низкий уровень сывороточного ИФНγ‚ является следствием повышенного уровня ИЛ-4.
Показатели концентрации гамма-интерферона в обследуемой группе больных с ХРФ не зависели от уровня сывороточного иммуноглобулина Е. Таким образом, определение уровня ИФНγ, ответственного за ингибирование синтеза IgE в сыворотке крови, не имеет диагностического значения для вы-явления механизмов повышения IgE при ХРФ.
Кроме того‚ анализ полученных позволил сделать вывод о необходи-мости формирования групп больных, в первую очередь, в зависимости от остроты процесса при ХРФ (ремиссия, подострый период, обострение). Нам представляется, что оценка уровня ИЛ-4 и ИФНγ в период обострения позво-лит получить большую информацию о характере иммунного ответа при ХРФ.
4.2. Интерлейкин-4 и гамма-интерферон при хроническом остео-миелите

Остеомиелит – гнойное воспаление костного мозга, распространяю-щееся на близлежащие ткани. Возникает в результате заражения организма бактериями гноеродной природы на фоне сниженной иммунной реактивности.
Результаты многочисленных клинико-лабораторных наблюдений пока-зывают, что при О. происходят изменения в иммунной системе организма. [Панченко М. К., Вертигора И.П., Грицай Н. П. Комплексное лечение больных с хроническим остеомиелитом с применением костной пласти-ки // Вестн. хир. – 1988. –№10. –С.42-46 Пинегин Б. Ф., Юдина Т. И., Карсанова М. И. Общие вопросы иммунитета, иммунодиагностики и иммунотерапии на модели хирургических инфекций // Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармако-логии. –М.,1998. –С 10-178 Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Вторичные иммунодефициты: клиника, диагностика, лечение // Иммунология.-1999. -№2. –С.14-17 ] В зависимости от типа микроорганизма и состояния макро-организма (выраженности системного воспалительного ответа, длительности заболевания, эндотоксемии и т.д.) при О. возникают различные нарушения клеточного и гуморального иммунитета, которые характеризуются снижени-ем фагоцитарной активности, изменением синтеза компонентов комплемента, отсутствием или снижением цитотоксичности лимфоцитов и макрофагов, изменением цитокинового статуса организма [Вишневский А. А., Тиходеев С. А., Андрианова Т. Р. Белки острой фазы, молекулы низкой и средней массы в оценке эндотоксемии при остеомиелите позвоночника // Труды городской многопрофильной бльницы №2. – СПб.: Ольга, 2001.-С.4-11 Тиходеев С. А., Вишневский А. А. Неспецифический остеомиелит позво-ночника. –СПб.:Изд.дом СПбМАПО, 2004. -250с]
Течение воспалительных заболеваний зависит от состояния иммунной системы и от степени выраженности воспалительного ответа. В этой связи ранняя иммунодиагностика и оценка стадии заболевания является неотъем-лемым комплексом в лечении пациентов, позволяет не только прогнозировать течение заболевания, но и дает возможность подобрать патогенетическую терапию. [Вишневский А. А., Орлов А. Б., Тиходеев С. А. Выбор иммуномодулирующей терапии при неспецифическом остеомиелите по-звоночника // Вестн. хир. Т.165.-№2.-2006.-С.32-36]
Исследование уровня цитокинов у здоровых людей и больных О. по-может понять роль этих молекул в течении заболевания, что можно будет ис-пользовать для ранней диагностики и лечении препаратами цитокинов.
Результаты исследования содержания интерлейкина-4 показывают дос-товерное повышение уровня ИЛ-4‚ по сравнению с контрольной группой‚ как у больных с повышенными‚ так и нормальными значениями общего имму-ноглобулина Е. Результаты исследования уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови у больных с хроническим остеомиелитом приведены на рис. 10 и табл. 2 (Приложение 2).
Повышение уровня ИЛ-4 в сыворотке крови больных свидетельствуют о вовлечении этого цитокина в процесс воспаления при хроническом остео-миелите. Известно, что некоторые бактерии способны выключать процессы антителообразования через индукцию факторов, препятствующих активации Т-клеток [Белохвостикова Т.С., Кирдей Л.Е., Гаврилова Е.Ю., Промтов М.В., Леонова С.Н., Кирдей Е.Г. Коррекция вторичных нарушений иммунной сис-темы при хроническом посттравматическом остеомиелите./Медицинская иммунология, 2002, т.4, №2, с.228-229.]. Не исключено‚ что повышение уровня ИЛ-4 является одним из звеньев в цепочке иммунного ответа, приво-дящего к отсутствию или снижению цитотоксичности Т-лимфоцитов и мак-рофагов при хроническом остеомиелите. Наши данные согласуются с дан-ными ряда авторов о ингибировании цитотоксической активности Т-лимфоцитов и макрофагов при остеомиелите [Вишневский А. А., Тиходеев С. А., Андрианова Т. Р. Белки острой фазы, молекулы низкой и средней массы в оценке эндотоксемии при остеомиелите позвоночника // Труды городской многопрофильной бльницы №2. – СПб.: Ольга, 2001.-С.4-11 Тиходеев С. А., Вишневский А. А. Неспецифический остеомиелит позво-ночника. –СПб.:Изд.дом СПбМАПО, 2004. -250с]. Вероятно‚ ИЛ-4 стиму-лирует пролиферацию тимоцитов и Т-клеток и вызывает рост тучных клеток при развитии и течении воспаления при хроническом остеомиелите‚ и таким образом, играет центральную роль в модуляции иммунного ответа.
Как видно из результатов нашего исследования‚ в обеих группах паци-ентов (с повышенным уровнем и нормальными значениями IgЕ) не выявлено корреляции уровня сывороточного ИЛ-4 с уровнем общего IgE. Вероятно‚ что отсутствие статистически значимых отличий в этих группах обусловлено межклеточным характером действия ИЛ-4 и различной кинетикой синтеза указанных субстанций. Таким образом, определение уровня ИЛ-4‚ как цито-кина‚ ответственного за выработку IgE в сыворотке крови‚ не имеет диагно-стического значения для выявления механизмов повышения IgE при хрони-ческом остеомиелите.
В ходе изучения уровня гамма-интерферона установлено достоверное повышение уровня ИФНγ‚ по сравнению с контрольной группой‚ как у боль-ных с повышенными‚ так и нормальными значениями общего иммуноглобу-лина Е. Результаты исследования уровня гамма-интерферона в сыворотке крови у больных с хроническим остеомиелитом приведены на рис. 11 и табл. 2 (Приложение 2).
Известно‚ что гамма-интерферон способствует более эффективному уничтожению макрофагами внутриклеточных микроорганизмов[Holter W., Grunow R., Stockinger H., et al.//J.Immunol.-1986.- V.136.-N.6.-P.2171.]‚ т.е. ИФНγ является мощным активатором макрофагов. Однако‚ нарушения в кле-точном и гуморальном иммунитете при остеомиелите приводят к снижению фагоцитарной активности. Вероятно‚ что повышение уровня ИФНγ в обсле-дованной группе больных с хроническим остеомиелитом‚ является специфи-ческой реакцией организма‚ приводящей к активации макрофагов. Не исклю-чено‚ что повышение концентрации ИФНγ является одним из этапов в каскаде реакций‚ ведущих к повышению возможностей специфической и неспе-цифической защиты организма‚ и‚ ограничивающих развитие воспаления при хроническом остеомиелите.
Как видно из результатов нашего исследования‚ в обеих группах паци-ентов (с повышенным уровнем и нормальными значениями IgЕ) не выявлено коррелятивных связей сывороточного ИФНγ с уровнем общего IgE. Таким образом, определение уровня ИФНγ‚ как цитокина‚ ответственного за инги-бирование синтеза IgE в сыворотке крови‚ не имеет диагностического значе-ния для выявления механизмов повышения IgE при хроническом остеомие-лите.
Так же как и при анализе данных об уровне цитокинов при ХРФ был сделан вывод‚ что при хроническом остеомиелите необходимо формировать группы больных, в зависимости от остроты процесса (ремиссия, подострый период, обострение).
Таким образом, в настоящее время не вызывает сомнения, что цитокины являются важнейшими факторами иммунопатогенеза. А изучение уровня цитокинов – медиаторов иммунитета – позволяет получить информацию о функциональной активности различных типов иммунокомпетентных клеток и делать вывод о характере течения гнойно-воспалительного процесса.
Безусловно‚ уровень цитокинов целесообразнее измерять в соответст-вующих тканях после экстракции тканевых протеинов из биоптатов соответ-ствующих органов или в естественных жидкостях‚ поскольку цитокины яв-ляются локальными медиаторами. Подобные исследования будут являться предметом нашего дальнейшего изучения иммунных механизмов в патогенезе больных с ГВЗ.


ВЫВОДЫ

1. Обнаружено достоверное повышение (по сравнению с контроль-ной группой) концентрации интерлейкина-4 в сыворотке крови больных с хроническим рецидивирующим фурункулёзом‚ и на фоне повышенного и на фоне нормального уровня общего иммуноглобулина Е.
2. Показатели концентрации гамма-интерферона в сыворотке крови больных с повышенным и нормальным уровнем общего иммуноглобулина Е при хроническом рецидивирующем фурункулёзе достоверно не отличались от показателей концентрации гамма-интерферона контрольной группы.
3. Обнаружено достоверное повышение (по сравнению с контроль-ной группой) концентрации интерлейкина 4 в сыворотке крови больных с хроническим остеомиелитом‚ и на фоне повышенного и на фоне нормального уровня общего иммуноглобулина Е.
4. Обнаружено достоверное повышение (по сравнению с контроль-ной группой) концентрации гамма-интерферона в сыворотке крови больных с хроническим остеомиелитом‚ и на фоне повышенного и на фоне нормального уровня общего иммуноглобулина Е.
5. Показатели концентрации интерлейкина 4 в группах пациентов с повышенным и нормальным показателем общего иммуноглобулина Е при хроническом рецидивирующем фурункулёзе и хроническом остеомиелите‚ достоверно не отличались друг от друга.
6. Показатели концентрации гамма-интерферона не зависели от по-казателей общего иммуноглобулина Е в обследуемых группах больных с хроническим рецидивирующим фурункулёзом и хроническим остеомиели-том.

ЛИТЕРАТУРА

1. Ашмарин Ю. Я., Креинин В. М. Фурункулез. М.,1974. 12-23 с.
2. Белохвостикова Т. С., Кирдей Л. Е., Гаврилова Е. Ю., Промтов М. В., Леонова С. Н., Кирдей Е. Г. Коррекция вторичных нарушений иммунной системы при хроническом посттравматическом остеомиелите // Медицинская иммунология. 2002. т.4. №2. С. 228-229.
3. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М.: Медицина, 1994г. 485-487 с.
4. Вишневский А. А., Орлов А. М. К вопросу об оценке иммунологическо-го статуса у больных с неспецифическим остеомиелитом позвоночника // Вестн. хир. 2004. №5. С. 73-78.
5. Вишневский А. А., Орлов А. Б., Тиходеев С. А. Выбор иммуномодули-рующей терапии при неспецифическом остеомиелите позвоночника // Вестн. хир. 2006. Т.165. №2. С. 32-36.
6. Вишневский А. А., Тиходеев С. А., Андрианова Т. Р. Белки острой фазы, молекулы низкой и средней массы в оценке эндотоксемии при остеомиелите позвоночника // Труды городской многопрофильной бльницы №2. СПб.: Ольга, 2001. С.4-11.
7. Вишневский А. А., Тиходеев С. А. К вопросу об особенностях течения остеомиелита и его диагностика // Современные направления в диагностике, лечении и профилактике заболеваний: Труды городской многопрофильной больницы №2. СПб: Ольга, 2002. С.91-98.
8. Демьянов А. В., Котов А. Ю., Симбирцев А. С. Диагностическая цен-ность исследования уровней цитокинов в клинической практике // Цитокины и воспаление. 2003. Т. 2. № 3. С. 20-35.
9. Дранник Г. Н. Клиническая иммунология и аллергология. МИА. М. 2003г. 98-109 с.
10. Завьялов В. П. Структурно-функциональная классификация и эволюция цитокинов // Вестник РАМН. 1993. №2. С. 8 – 10.
11. Кашкин К. П. Цитокины иммуной системы: основные свойства и имму-нобиологическая активность // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. №11. С. 21 – 32.
12. Керко О. В., Гусева В. Н., Потапенко Е. И., Якунова О. А. и др. Роль им-мунологических показателей при туберкулезе и остеомиелите позвоночника // Медицинская иммунология. 2005. №2-3. С.243-244.
13. Кожные болезни // Под ред. Кубанова А. А. М.:ГЭОТАР Медицина, 1999г. 175-184с.
14. Кольман Я., Рём К. – Г. Наглядная биохимия. «Мир», 378-379с.
15. Лакин Г. Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. 352с.
16. Манько А. С.,. Сетдикова Н. Х., Латышева Т. В.,. Горностаева Ю. А., Котова О. М., Голубева Н. М. «Клинико-иммунологическая эффективность серамида у больных хроническим рецидивирующим фурункулезом» // Рос-сийский Аллергологический Журнал. 2005г. №5. С. 34-36.
17. Панченко М. К., Вертигора И.П., Грицай Н. П. Комплексное лечение больных с хроническим остеомиелитом с применением костной пластики // Вестн. хир. 1988. №10. С. 42-46.
18. Пекарева Н. А., Чупрова А. В., Шваюк А. П., Горбенко О. М., Обухова О. О., Трунов А. Н. Сравнительный анализ баланса цитокинов в сыворотке крови и моче у детей с хроническим пиелонефритом в стадии клинической ремиссии // Аллергология и иммунология. 2007. том 8. №1. С. 132-133.
19. Перетня Н. Н.‚ Сенькова Л. В.‚ Добродеев К. Г., Капутин С. Л. и др. К вопросу о роли IgE // Объединённый иммунологический форум: Тезисы. Ека-теринбург. 2004. С. 119.
20. Перцева Т. А., Конопкина Л. И. Интерфероны и их индукторы // Український хіміотерапевтичний журнал. 2001. №2. С. 62-67.
21. Пинегин Б. Ф., Юдина Т. И., Карсанова М. И. Общие вопросы иммуни-тета, иммунодиагностики и иммунотерапии на модели хирургических ин-фекций // Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. М. 1998. С 10-178.
22. Сетдикова Н. Х., Латышева Т. В. Комплексные механизмы развития хронического рецидивирующего фурункулеза и пути их коррекции // Имму-нология. 2000. №3. С. 48-50.
23. Симбирцев А. С. Цитокины – новая система регуляции защитных реак-ций организма // Цитокины и воспаление. 2002. № 1. С. 9–16.
24. Тиходеев С. А., Вишневский А. А. Неспецифический остеомиелит по-звоночника. СПб.: СПбМАПО, 2004. 250с.
25. Хаитов Р. М., Игнатьева Г. А., Сидорович И. Р. Иммунология: учебник. М.: Медицина, 2000. 186-189с.
26. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Вторичные иммунодефициты: клиника, ди-агностика, лечение // Иммунология. 1999. №2. С. 14-17.
27. Agui T. Stimulation of interleukin-6 production by endothelin in rat bone marrow-derived stromal cells. // Blood. 1994. Vol. 84. P. 25-31.
28. Anliytsky W., Schuler M,, Peschel C. // Drugs. 1994. V. 48. P. 667.
29. Becker S., Groner B. & Muller C.W. Three-dimentional structure of the Stat3b homodimer bound to DNA Nature, 394, 1998 Р. 145-151.
30. Brisce J. et al. JAKs and STATs branch out Trends in Cell Biology. 1996. Р. 336 – 340.
31. Holter W., Grunow R., Stockinger H., et al.//J.Immunol.-1986. V.136. N.6. P.21-71.
32. Keegan A., Nelms K., Wang L., Pierce J., Paul W. // Immunol. Today. 1994. V. 15. P. 423.
33. Paul W. // Blood. 1991. V. 77. P. 18-59.
34. Paul W.E., Seder R.A. Lymphocyte responses and cytokines Cell. 76. Р. 241-251.
35. Young H.A. // Seminars in Virology. 1995. V. 6. P. 175-180.

ПРИЛОЖЕНИЕ
Приложение 1. Интерлейкин-4 (IL4) и γ -интерферон (IFNγ) у больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом

Таблица 1. Содержание интерлейкина-4 (IL4) и γ -интерферона (IFNγ) в сыворотке крови больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом в зависимости от уровня IgE
Цитокины
Контрольная группа
(n=10) Концентрация цитокинов у больных с повышенным
уровнем
сывороточного
IgE‚ пг/мл (n=14) Концентрация цитокинов у больных с
нормальными
значениями
сывороточного
IgE‚ пг/мл (n=20)
Интерлейкин-4 (IL4) 1,13 ± 0,5 10,5 ± 2,4* 7,0 ± 1,7**
γ -интерферон (IFNγ) 15,5 ± 8,5 21,2 ± 7,65 24,6 ± 13,1
Примечание. * - достоверно по сравнению с контролем, р< 0,05
** - достоверно по сравнению с контролем, р< 0,01

 

Приложение 2. Интерлейкин-4 (IL4) и γ -интерферон (IFNγ) у больных с хроническим остеомиелитом
Таблица 2. Содержание интерлейкина-4 (IL4) и γ -интерферона (IFNγ) в сыворотке крови больных с хроническим остеомиелитом в зависимости от уровня IgE
Цитокины
Контрольная группа
(n=10) Концентрация цитокинов у больных с повышенным
уровнем
сывороточного
IgE‚ пг/мл‚ (n=10) Концентрация цитокинов у больных с
нормальными
значениями
сывороточного
IgE‚ пг/мл‚ (n=5)
Интерлейкин-4 (IL4) 1,13 ± 0,5 9,2 ± 2,52** 9,8 ± 2,74*
γ -интерферон (IFNγ) 15,5 ± 8,5 54,94 ± 35,7* 46,13 ± 28,3*
Примечание. * - достоверно по сравнению с контролем, р<0,05
** - достоверно по сравнению с контролем, р<0,01

Приложение 3.
Таблица 3. Цитокины человека
Цитокин Аббревиатура цитокина
Aggrecan / Protoglycan
Amyloid beta 1-42
Amyloid beta 1-42 (N)
Amyloid beta 1-42 N3pE
GRO a / MGSA human
GRO b human
RANTES
RANTES
Serum Amyloid A SAA
Антагонист рецептора интерлейкина-1 IL-1RA
Антитела к интерферону-a
Интерлейкин-1a
IL-1a
Интерлейкин-1b IL-1b
Интерлейкин-1b (ультрачувствит.) IL-1b
Интерлейкин-2 IL-2
Интерлейкин-3 IL-3
Интерлейкин-3 IL-3
Интерлейкин-4
IL-4
Интерлейкин-4 (ультрачувствит.)
IL-4
Интерлейкин-5
IL-5
Интерлейкин-6 IL-6
Интерлейкин-6 (ультрачувствит.) IL-6
Интерлейкин-7 IL-7
Интерлейкин-8 IL-8
Интерлейкин-8 (ультрачувствит.) IL-8
Интерлейкин-10 IL-10
Интерлейкин-10 (ультрачувствит.)
IL-10
Интерлейкин-12 (ультрачувствит.) IL-12
Интерлейкин-12 + p40 IL-12 + p40
Интерлейкин-13 IL-13
Интерлейкин-15 IL-15
Интерлейкин-16 IL-16
Интерлейкин-17 IL-17
Интерлейкин-18 IL-18
Интерферон-a IFN-a
Интерферон-b IFN-b
Интерферон-g IFN-g
Интерферон-g
IFN-g
Маркеры апоптоза APO-1 / FAS CD95
Макрофагальный белок воспаления MIP-1a
Макрофагальный белок воспаления MIP-1b
Макрофагальный белок воспаления MIP-4
Макрофагальный белок воспаления MIP-5
Молекула адгезии сосудистого эндотелия 1 типа sVCAM-1
Молекула межклеточной адгезии-1 sICAM-1
Молекула межклеточной адгезии-1 sICAM-1
Моноцитарный хемотаксический фактор-1 MCP-1
Моноцитарный хемотаксический фактор-1 MCP-3
Растворимый CD23 sCD23
Растворимый рецептор I фактора некроза опухолей sTNF-RI
Растворимый рецептор II фактора некроза опухолей sTNF-RII
Растворимый рецептор интерлейкина-2 sIL-2R
Растворимый рецептор интерлейкина-6 sIL-6R
Растворимый рецептор фактора ингибиров. лейкемии sLIF-R
Тканевый ингибитор металлопротеиназы-1 TIMP-1
Фактор ингибирования лейкемии LIF
Фактор ингибирования лейкозных клеток LIF-HILDA
Фактор некроза опухолей-a TNF-a
Фактор некроза опухолей-a (ультрачувствит.) TNF-a
Фактор стволовых клеток SCF human
Эндотелиально-моноцитарно-активир. полипептид-II EMAP-II
Эотаксин Eotaxin

 




Комментарий:

Исследование уровня цитокинов у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями


Рекомендовать другу
50/50         Партнёрка
Отзывы